Galvenā atšķirība starp BCA un Bredfordas testu ir tāda, ka BCA tests ir laikietilpīgs un mazāk precīzs, savukārt Bredfordas tests ir ātrs un precīzs.
BCA un Bredforda tests ir divas proteīna koncentrācijas noteikšanas metodes. Šiem diviem testiem ir atšķirīgi pārbaudes principi un atšķirības to precizitātē.
Kas ir BCA tests?
BCA tests vai bicinhonīnskābes tests ir bioķīmisks tests, kas noder, lai noteiktu kopējo olb altumvielu koncentrāciju šķīdumā. Šī metode ir nosaukta arī par Smita testu tās izgudrotāja Pola K. Smita vārdā. Šī analītiskā metode parāda līdzības ar Lowry proteīna testu, Bredfordas proteīna testu vai biureta reaģentu. Mēs varam novērot kopējo olb altumvielu koncentrāciju noteiktā paraugā, mainot parauga šķīduma krāsu, kas mainās no zaļas uz purpursarkanu. Šīs krāsas izmaiņas notiek proporcionāli olb altumvielu saturam. Pēc tam mēs varam izmantot kolorimetrisko metodi, lai analizētu krāsas intensitāti un olb altumvielu saturu paraugā.
BCA proteīna noteikšanas metode
Apsverot BCA testa mehānismu, tipiskais BCA šķīdums satur ļoti sārmainu šķīdumu, kura pH ir gandrīz aptuveni 11,25, un šī šķīduma sastāvdaļas ir bicinhonīnskābe, nātrija karbonāts, nātrija bikarbonāts, nātrija tartrāts un vara(II) sulfāta pentahidrāts. Šis tests galvenokārt ir atkarīgs no divām ķīmiskām reakcijām: vara (II) reducēšanās uz varu (I) ar peptīdu saitēm proteīnā un divu bicinhonīnskābes molekulu helātu veidošanās ar vara (I) jonu, kā rezultātā veidojas purpursarkans komplekss, kas var absorbē gaismu 562 nm viļņa garumā. Pirmajā reakcijā ar peptīdu saitēm samazinātais vara(II) daudzums ir proporcionāls proteīna daudzumam paraugā.
Kas ir Bredfordas tests?
Bradfordas tests ir spektroskopiska analītiska metode, kas noderīga proteīna koncentrācijas mērīšanai šķīdumā. Šo metodi 1976. gadā izstrādāja Mariona M. Bredforda, un tā ir salīdzinoši ātra un precīza metode.
Proteīna un Bredforda reaģenta krāsu reakcija
Mēs varam izmantot šo metodi, lai noteiktu proteīna daudzuma koncentrāciju paraugā. Ķīmiskā reakcija, kas notiek paraugā šīs pārbaudes laikā, ir atkarīga tikai no proteīna aminoskābju sastāva paraugā.
Bredfordas proteīna noteikšanas metode
Apsverot šī testa metodi, tas ir kolorimetrisks proteīna tests, kura pamatā ir krāsas Coomassie Brilliant Blue G-250 absorbcijas nobīde. Parasti šī krāsviela pastāv trīs veidos: anjonu (zilā) formā, neitrālā (zaļā) formā un katjonu (sarkanā) formā. Tāpēc skābos apstākļos krāsviela maina savu krāsu no sarkanas uz zilu. Tas ir tāpēc, ka proteīns saistās ar krāsvielu. Turpretim, ja nav olb altumvielu, kas saistās ar krāsvielu, krāsas maiņa neparādās, šķīdums iegūst sarkanbrūnu krāsu. Šī krāsviela spēj veidot spēcīgu, nekovalentu kompleksu ar proteīna karboksilgrupu, izmantojot Van der Vāla spēkus un elektrostatiskos pievilkšanas spēkus.
Kāda ir atšķirība starp BCA un Bradford Assay?
BCA un Bredforda tests ir divas proteīna koncentrācijas noteikšanas metodes. Šiem diviem testiem ir atšķirīgi pārbaudes principi un atšķirības to precizitātē. Galvenā atšķirība starp BCA un Bredforda testu ir tāda, ka BCA tests ir laikietilpīgs un mazāk precīzs, savukārt Bredfordas tests ir ātrs un precīzs.
Šajā infografikā tabulas veidā ir apkopotas atšķirības starp BCA un Bredfordas testu.
Kopsavilkums - BCA pret Bredforda testu
BCA tests vai bicinhonīnskābes tests ir bioķīmisks tests, kas noder, lai noteiktu kopējo olb altumvielu koncentrāciju šķīdumā. Bredforda tests ir spektroskopiska analītiskā metode, kas ir noderīga proteīna koncentrācijas mērīšanai šķīdumā. Galvenā atšķirība starp BCA un Bredforda testu ir tāda, ka BCA ir laikietilpīgs un mazāk precīzs, savukārt Bredfordas tests ir ātrs un precīzs.
