Galvenā atšķirība starp nick translāciju un gala aizpildīšanu ir tāda, ka nika translācija ir process, kurā tiek izveidotas iezīmētas DNS zondes dažādām hibridizācijas reakcijām, savukārt gala aizpildīšana ir paņēmiens, kas rada neasus fragmentus, pievienojot nukleotīdus vienpavediena pārkarēm.
Sikla tulkošana un gala aizpildīšana ir divas metodes, ko izmanto molekulārajā bioloģijā. Nika translāciju izmanto, lai marķētu zondes hibridizācijai, lai noteiktu specifiskas nukleotīdu sekvences. Gala pildījumu izmanto, lai izgatavotu neasus fragmentus, kuriem bija lipīgi gali ar vienpavediena pārkarēm. Abām metodēm ir liela nozīme, un tās regulāri veic molekulāro pētījumu laboratorijās.
Kas ir Nika tulkojums?
Siku tulkošana ir svarīga metode, ko izmanto, lai sagatavotu marķētas zondes dažādām molekulāri bioloģiskām metodēm, piemēram, blotēšanai, in situ hibridizācijai, fluorescējošai in situ hibridizācijai utt. Tā ir DNS marķēšanas in vitro metode. DNS zondes izmanto, lai identificētu specifiskas DNS vai RNS sekvences. Ar marķētas zondes palīdzību no sarežģīta nukleīnskābes maisījuma var iezīmēt vai vizualizēt specifiskus fragmentus. Tāpēc marķētās zondes tiek sagatavotas, izmantojot dažādas metodes. Nika tulkošana ir viena no šādām metodēm, kas ražo iezīmētas zondes ar DNāzes 1 un DNS polimerāzes 1 enzīmu palīdzību.
Attēls 01: Nika tulkojums
Nika tulkošanas process sākas ar DNāzes 1 enzīma aktivitāti. DNāze 1 ievieš spraugas divpavedienu DNS fosfāta mugurkaulā, sadalot fosfodiestera saites starp nukleotīdiem. Kad niķis ir izveidots, tiks izveidota brīva nukleotīda 3′ OH grupa, un uz to iedarbosies DNS polimerāzes 1 enzīms. DNS polimerāzes 1 eksonukleāzes aktivitāte no 5′ līdz 3′ noņem nukleotīdus no spraugas DNS virknes 3′ virzienā.
Tajā pašā laikā darbojas DNS polimerāzes 1 enzīma polimerāzes aktivitāte un pievieno nukleotīdus, lai aizstātu noņemtos nukleotīdus. Ja nukleotīdi ir marķēti, aizstāšana notiks ar marķētajiem nukleotīdiem, un tas iezīmēs DNS identifikācijai. Visbeidzot, šo tikko sintezēto iezīmēto DNS var izmantot kā zondi dažādās hibridizācijas reakcijās.
Kas ir beigu aizpildīšana?
Galu aizpildīšana ir paņēmiens, ko izmanto molekulārajā bioloģijā, lai izveidotu neasus fragmentus. Ierobežotā gremošana rada fragmentus ar pārkarēm. Šie fragmenti var nebūt saderīgi, lai ligētu plazmīdu vektoros. Vektori bieži ir neass, lai varētu savienot nesaderīgus galus. Tāpēc fragmentus ar pārkarēm var padarīt neasus, pievienojot nukleotīdus komplementārajai virknei, izmantojot pārkari kā polimerizācijas veidni. Šis process ir zināms kā beigu aizpildīšana.
DNS polimerāzes, piemēram, DNS polimerāzes I Klenova fragments un T4 DNS polimerāze, katalizē gala pildījumu. Tie pievieno nukleotīdus, lai aizpildītu (5′ → 3′) un košļātu atpakaļ (3′ → 5′). Kad lipīgie gali ir piepildīti, tie kļūst neasi un ir gatavi sasaistīt vektorā.
Turklāt gala aizpildīšanu var izmantot DNS molekulu marķēšanai. Tomēr to var izmantot tikai, lai marķētu DNS molekulas ar lipīgiem galiem. Salīdzinot ar segvārdu tulkošanu, gala aizpildīšana ir maigāka metode, kas reti izraisa DNS pārtraukumus.
Kādas ir līdzības starp Nika tulkojumu un beigu aizpildīšanu?
- Gan segvārdu tulkošana, gan gala aizpildīšana ir molekulāri bioloģiskas metodes.
- Tos var izmantot zondu marķēšanai.
- Abi ir in vitro
Kāda ir atšķirība starp Nika tulkojumu un beigu aizpildīšanu?
Siku tulkošana ir paņēmiens, kas izveido marķētas zondes hibridizācijai. Turpretim gala aizpildīšana ir paņēmiens, kas rada neasus fragmentus ligēšanai vektoros. Tātad, šī ir galvenā atšķirība starp segvārda tulkošanu un beigu aizpildīšanu. Turklāt Nika tulkošanai ir jāizmanto eksonukleāzes aktivitāte no 5' līdz 3', savukārt gala aizpildīšanai nav nepieciešama eksonukleāzes aktivitāte no 5' līdz 3'.
Tālāk esošajā infografikā ir sīkāk parādītas atšķirības starp segvārdu tulkošanu un beigu aizpildīšanu.
Kopsavilkums - Nika tulkojums pret beigu aizpildīšanu
Nika tulkošana ir metode, kas DNS iekļauj radioaktīvi iezīmētus nukleotīdus. Tas sintezē iezīmētās zondes, pamatojoties uz DNāzes 1 un E. coli DNS polimerāzes 1 enzīmu aktivitātēm. Savukārt gala aizpildīšana ir paņēmiens, kas rada neasus fragmentus. Ja fragmentiem ir lipīgi gali (vienpavediena pārkares), ir nepieciešams tiem padarīt neasus galus, lai tie varētu iesiet vektoros. Gala aizpildīšana pievieno saderīgus nukleotīdus un izveido neasus galu fragmentus, lai padarītu tos saderīgus ligēšanai. Tādējādi šeit ir apkopota atšķirība starp segvārdu tulkošanu un beigu aizpildīšanu.
