Galvenā atšķirība - horizontālā un vertikālā gēla elektroforēze
Gēla elektroforēze ir laboratorijas metode, ko izmanto ģenētikā, lai atdalītu maisījumus, kas satur DNS, RNS un citus proteīnus atbilstoši to attiecīgajam lādiņam un molekulārajam izmēram. DNS, RNS vai olb altumvielas, kas ir jāatdala, izmantojot šo metodi, tiek izvadītas caur želeju, kurā ir mazas poras. Molekulas caur želeju virza elektriskais lauks. Molekulas iziet cauri gēla porām, un kustības ātrums ir apgriezti proporcionāls to attiecīgajiem garumiem. Tāpēc molekulas ar mazāku molekulmasu pārvietosies ātrāk nekā molekulas ar lielāku molekulmasu. Elektrisko lauku ģenerē lādiņa atšķirība abos gēla galos. Vienā galā ir pozitīvs lādiņš, bet otrā galā ir negatīvs lādiņš. Tā kā DNS un RNS molekulas ir negatīvi lādētas, tās tiks piesaistītas gēla pozitīvi lādētajam galam. Gēla elektroforēzei var būt divas dažādas metodes: horizontālā gēla elektroforēze un vertikālā gēla elektroforēze. Horizontālās gēla elektroforēzes gadījumā gēls atrodas horizontālā orientācijā un ir iegremdēts nepārtrauktas darbības buferšķīdumā, kas atrodas pašā gēla kastītē. Vertikālajā gēla elektroforēzē bufersistēma ir orientēta vertikāli un ir pārtraukta ar divām kamerām augšpusē un apakšā ar attiecīgi katodu un anodu. Šī ir galvenā atšķirība starp horizontālo un vertikālo gēla elektroforēzi.
Kas ir horizontālā gēla elektroforēze?
Horizontālā gēla elektroforēze izmanto pamata teoriju DNS, RNS vai olb altumvielu molekulu atdalīšanai atbilstoši to attiecīgajam molekulārajam izmēram un lādiņam. Šajā tehnikā gēls atrodas horizontālā orientācijā un ir iegremdēts nepārtrauktā buferšķīdumā. Agarozes želeju izmanto, lai sadalītu gēla kastīti divos nodalījumos. Gēla kastes vienā galā ir anods, bet otrā galā ir katods. Kad tiek pielietota strāva, šajā tehnikā izmantotais buferis ļauj izveidot lādiņa gradientu. Uzliekot lādiņu, gēlam ir tendence uzkarst. Buferis darbojas arī kā dzesēšanas šķidrums, kas uztur temperatūru optimālā līmenī. Darbības bufera recirkulācija novērš pH gradienta veidošanos. Nepārtrauktu bufera sistēmu nevar izmantot horizontālajā gēla elektroforēzē, jo abi gēla sistēmas nodalījumi tiek savienoti ar darba buferi. Akrilamīdu izmanto gēla elektroforēzes laikā, lai atdalītu olb altumvielu maisījumus.
Attēls 01: Horizontālā gēla elektroforēze
Horizontālajā gēla elektroforēzē akrilamīdu nevar izmantot, jo gēla kastīte ir pakļauta skābekļa iedarbībai. Skābekļa klātbūtnes dēļ tiek kavēta akrilamīda polimerizācija, kas traucē gēla veidošanos. Horizontālā gēla elektroforēze ir vienkārša metode, ko izmanto DNS un RNS atdalīšanai.
Kas ir vertikālā gēla elektroforēze?
Vertikālās gēla elektroforēzes tehnika darbojas saskaņā ar primāro gēla elektroforēzes teoriju, taču tiek uzskatīta par sarežģītāku nekā horizontālās gēla elektroforēzes metode. Šī metode izmanto pārtrauktu buferi. Katods atrodas augšējā kamerā, un anods atrodas apakšējā kamerā. Katrā nodalījumā esošie elektrodi nodrošina nepieciešamo elektrisko lauku. Starp abām uzstādītajām stikla plāksnēm ielej plānu želejas kārtu. Tāpēc gēla augšējā daļa ir iegremdēta augšējā kamerā, bet gela apakšējā daļa ir iegremdēta kamerā apakšā. Kad strāva tiek pielietota, neliela bufera daļa pārvietojas uz apakšējo kameru no augšējās kameras caur želeju. Šajā tehnikā izmantotā strāva ir minūšu vienībās.
2. attēls: vertikālā gēla elektroforēze
Vertikālā gēla elektroforēzē buferšķīdums plūst tikai caur gēlu. Tas ļauj precīzi kontrolēt sprieguma gradientu atdalīšanas posmā. Var izmantot akrilamīda želeju, jo nodalījumi nav pakļauti atmosfēras skābekļa iedarbībai. Tā kā akrilamīda gēla poru izmērs ir mazāks, precīzu atdalīšanu var panākt ar augstāku izšķirtspēju.
Kādas ir līdzības starp horizontālo un vertikālo gēla elektroforēzi?
- Abas sistēmas darbojas saskaņā ar gēla elektroforēzes pamata teoriju.
- Anodu un katodu izmanto, lai nodrošinātu nepieciešamo elektrisko lauku abās sistēmās.
Kāda ir atšķirība starp horizontālo un vertikālo gēla elektroforēzi?
Horizontālā vs vertikālā gēla elektroforēze |
|
| Horizontālā gēla elektroforēze ir gēla elektroforēzes tehnika, kurā gēls atrodas horizontālā orientācijā. | Vertikālā gēla elektroforēze ir gēla elektroforēzes tehnika, kurā gēls ir orientēts vertikāli. |
| Buferis | |
| Horizontālā gēla elektroforēze sastāv no nepārtraukta bufera. | Skriešanas buferis ir pārtraukts vertikālās gēla elektroforēzes laikā. |
| Akrilamīda lietošana | |
| Akrilamīdu nevar izmantot horizontālai gēla elektroforēzei, jo gēla kastīte ir pakļauta atmosfēras skābekļa iedarbībai. | Tā kā divu atsevišķu kameru dēļ gēls nav pakļauts atmosfēras skābekļa iedarbībai, akrilamīdu var izmantot vertikālai gēla elektroforēzei. |
| Funkcija | |
| Horizontālo gēla elektroforēzi biežāk izmanto DNS un RNS maisījumu, bet ne proteīnu atdalīšanai. | Vertikālo gēla elektroforēzi izmanto proteīnu maisījumu atdalīšanai. |
Kopsavilkums - horizontālā un vertikālā gēla elektroforēze
Gēla elektroforēze ir laboratorijas tehnika, ko plaši izmanto DNS, RNS un proteīnu molekulas saturošu maisījumu atdalīšanai. Ir divas gēla elektroforēzes metodes: horizontālā un vertikālā gēla elektroforēze. Horizontālajā gēla elektroforēzē darbības buferis ir nepārtraukts, savukārt vertikālajā gēla elektroforēzē tas ir pārtraukts. Šī ir atšķirība starp horizontālo un vertikālo gēla elektroforēzi. Abas sistēmas darbojas saskaņā ar kopējo gēla elektroforēzes principu.
Lejupielādēt PDF versiju par horizontālo un vertikālo gēla elektroforēzi
Varat lejupielādēt šī raksta PDF versiju un izmantot to bezsaistē saskaņā ar atsauces piezīmi. Lūdzu, lejupielādējiet PDF versiju šeit Atšķirība starp horizontālo un vertikālo gēla elektroforēzi.
