Galvenā atšķirība - Gram traips pret skābi izturīgs
Baktērijas ir ļoti mazi mikroorganismi. Tie ir caurspīdīgi, un tos ir grūti noteikt dzīves un nekrāsotos apstākļos. Tādējādi tiek izstrādātas dažādas krāsošanas metodes, lai atvieglotu baktēriju noteikšanu. Ir trīs galvenie krāsošanas paņēmienu veidi: vienkārša krāsošana, diferenciālā krāsošana un strukturālā krāsošana. Diferenciālā krāsošana ir metode, kas izmanto vairāk nekā vienu traipu, lai atšķirtu baktērijas. Grama traipi un skābes izturīgi traipi ir vispopulārāk pazīstami kā diferenciālie traipi. Gram krāsošana ir diferenciāla krāsošanas metode, kas sadala baktērijas divās grupās, kas pazīstamas kā grampozitīvās baktērijas un gramnegatīvās baktērijas. Skābi izturīgs traips ir diferenciāls traips, ko izmanto, lai identificētu pret skābi izturīgus organismus, piemēram, Mycobacterium no organismiem, kas nav izturīgi pret skābēm. Šī ir galvenā atšķirība starp Grama traipu un skābes izturīgo traipu.
Kas ir Gram Stain?
Grama krāsošana ir svarīga diferenciālas krāsošanas metode, ko izmanto baktēriju identificēšanai mikrobioloģijā. Šo paņēmienu 1884. gadā ieviesa dāņu bakteriologs Hanss Kristians Grams. Gramkrāsošana iedala baktērijas divās lielās grupās, ko sauc par grampozitīvām un gramnegatīvām, kas ir ļoti svarīgas baktēriju klasifikācijā un identificēšanā. Mikrobiologi studiju laikā veic gramu krāsošanu kā sākotnējo baktēriju raksturojuma posmu.
Baktērijas tiek grupētas, pamatojoties uz atšķirībām to šūnu sieniņās. Grampozitīvās baktērijas sastāv no bieza peptidoglikāna slāņa to šūnu sienā, savukārt gramnegatīvās baktērijas sastāv no plāna peptidoglikāna slāņa to šūnu sienā. Gramu krāsošanas rezultāts būs balstīts uz šūnu sienas peptidoglikāna slāņa biezuma atšķirību.
Grams krāsošana tiek veikta, izmantojot četrus dažādus reaģentus, proti; primārais traips, kodinātājs, atkrāsošanas līdzeklis un prettraips. Kristālvioleti un safranīnu izmanto attiecīgi kā primāro un prettraipu, savukārt gramus joda un 95% spirta izmanto attiecīgi kā kodinātāju un atkrāsotāju. Gramu traipu pamatdarbības ir šādas;
- Baktēriju uztriepi sagatavo uz tīra stikla priekšmetstikliņa, fiksē un atdzesē.
- Smear tiek pārpludināts ar kristālvioletu 1–2 minūtes.
- Uztriepes noskalo ar lēnu tekošu krāna ūdeni, lai noņemtu liekos traipus.
- Grams joda tiek uzklāts uz uztriepes uz 1 minūti.
- Uztriepe tiek izskalota ar lēni tekošu krāna ūdeni
- Uztriepi 2–5 sekundes mazgā ar 95% spirtu un noskalo ar lēni tekošu krāna ūdeni.
- Uztriepes tiek iekrāsotas ar safranīnu 1 minūti
- Uztriepes noskalo ar lēnu tekošu krāna ūdeni, izžāvē un novēro zem mikroskopa.
Gram traipa beigās gramnegatīvās baktērijas tiks novērotas rozā krāsā, savukārt grampozitīvās baktērijas tiks novērotas purpursarkanā krāsā.
Attēls 01: gramnegatīvās un grampozitīvās baktērijas
Graču traipa iznākumu nosaka peptidoglikāna slāņa biezums šūnu sieniņā. Krāsošanas laikā primārais traips un kodinātājs tiek viegli noņemti no gramnegatīvajām baktērijām un kļūst bezkrāsaini, jo tiem ir plāns peptidoglikāna slānis. Primārais traips tiek saglabāts grampozitīvās baktērijās, jo tām ir biezs peptidoglikāna slānis. Prettraips nebūs efektīvs grampozitīvām baktērijām primārā traipa aiztures dēļ. Tādējādi grampozitīvās baktērijas būs redzamas primārajā traipu krāsā, tas ir, purpursarkanā krāsā. Prettraips notraipīs gramnegatīvās baktērijas, un tās būs redzamas izvēlētā krāsā, kas ir safranīna krāsa. Tādējādi ir viegli iedalīt baktērijas divās grupās pēc gramu traipa, un tas ir vērtīgs baktēriju diferenciācijā un identificēšanā.
Kas ir skābi izturīgs?
Skābju noturība ir noteiktu baktēriju fiziska īpašība, jo īpaši to izturība pret skābju izraisītu atkrāsošanos krāsošanas procedūru laikā. Pēc iekrāsošanas šie organismi iztur atšķaidītas skābes un/vai etanola bāzes krāsas atkrāsošanas procedūras, kas ir izplatītas daudzos krāsošanas protokolos. Tādējādi šiem organismiem tiek dots nosaukums “ātrs ar skābi”. Šī īpašība tiek parādīta, jo to šūnu sieniņās ir augsts vaska materiāla (mikolskābes) līmenis. Šis tests ir ļoti svarīgs Mycobacterium tuberculosis identificēšanai.
2. attēls. Skābi izturīgās mikobaktērijas
Šo skābes noturīgo traipu izstrādāja Pols Ērlihs 1882. gadā. Ērliha skābes noturīgo paņēmienu modificēja Ziehl-Neelsen, un tagad to izmanto biežāk. Ar skābi ātrās krāsošanas procedūra ietver trīs dažādus reaģentus. Kā primārais traips tiek izmantots karbola fušīns. Kā atkrāsojošo līdzekli izmanto skābo spirtu. Methylene Blue tiek izmantots kā prettraips. Krāsošanas procedūru veic šādi.
- Primārais traips (karbolfuksīns) tiek uzklāts fiksētajam paraugam uz priekšmetstikliņa (visas šūnas tiks iekrāsotas sarkanā krāsā).
- Slaidu karsē, tvaicējot 5 minūtes, kas pareizi iedzen traipus šūnās.
- Pēc tam pievieno atkrāsojošo šķīdumu (tas noņem sarkano krāsvielu no visām šūnām, izņemot baktērijas, kas izturas pret skābi).
- Metilēnzilais ir pievienots kā prettraips (tas iekrāso visas atkrāsotās baktēriju šūnas).
- Skābi izturīgās baktērijas paliek sarkanas, bet neskābes ātrās baktērijas iekrāsojas zilā krāsā.
Kādas ir Gram Stain un Acid Fast līdzības?
- Gram krāsojums un Acid fast ir divas atšķirīgas krāsošanas metodes.
- Abas metodes iedala baktērijas divās grupās.
- Abās tehnikās izmanto divus traipus un vienu atkrāsošanu.
Kāda ir atšķirība starp Gram Stain un Acid Fast?
Gram Stain vs Acid Fast |
|
| Gramkrāsošana ir diferenciālas krāsošanas tehnika, kas iedala baktērijas divās grupās – grampozitīvās baktērijas un gramnegatīvās baktērijas. | Skābes izturīgs traips ir diferenciāls krāsojums, ko izmanto, lai identificētu skābi izturīgus organismus no organismiem, kas nav izturīgi. |
| Primary Stain | |
| Kristālvioleta ir visbiežāk izmantotais primārais traips gramu krāsošanā. | Karbola fuksīns ir primārais traips, ko izmanto skābes noturībai. |
| Atkrāsošanas līdzeklis | |
| 95% alkohola tiek izmantots kā atkrāsošanas līdzeklis gramu traipiem. | Skābs spirts tiek izmantots kā atkrāsošanas līdzeklis skābes ātrai lietošanai. |
| Counter Stain | |
| Gram traips izmanto safranīnu kā prettraipu. | Skābes izturīgs traips izmanto metilēnzilu kā prettraipu. |
| Novērojums | |
| Gramnegatīvās baktērijas tiek novērotas izvēlētā krāsā un grampozitīvās baktērijas tiek novērotas purpursarkanā krāsā. | Skābi izturīgās baktērijas tiek novērotas sarkanā krāsā, bet neskābes izturīgās baktērijas tiek novērotas zilā krāsā. |
Kopsavilkums - Gram Stain vs Acid Fast
Mikroorganismu vizualizācija dzīvā stāvoklī ir sarežģīta. Tāpēc bioloģiskie traipi un krāsošanas procedūras tiek plaši izmantotas, lai pētītu to īpašības. Diferenciālā krāsošana ir viens no krāsošanas paņēmieniem, ko izmanto baktēriju diferencēšanai. Grama krāsojums un skābes izturīgs krāsojums ir divas atšķirīgas krāsošanas metodes. Gramkrāsošana atšķir gramnegatīvās baktērijas un grampozitīvās baktērijas, pamatojoties uz to šūnu sieniņu biezumu. Ar skābi izturīgu krāsošanu atšķir skābi izturīgās baktērijas no neskābēm izturīgām baktērijām, pamatojoties uz mikolskābes saturu šūnu sieniņā. Šī ir atšķirība starp skābes izturīgo un gramu traipu.
Lejupielādēt Gram Stain vs Acid Fast PDF versiju
Varat lejupielādēt šī raksta PDF versiju un izmantot to bezsaistē saskaņā ar atsauces piezīmi. Lūdzu, lejupielādējiet PDF versiju šeit Atšķirība starp Gram Stain un Acid Fast.
