Galvenā atšķirība - nitroceluloze pret neilona membrānu
Blottēšana ir svarīgs paņēmiens specifisku DNS, RNS un proteīnu secību noteikšanai no to maisījumiem molekulārajā bioloģijā. To veic, izmantojot membrānu, ko sauc par blot. Ir dažādas blotēšanas metodes, piemēram, ziemeļu, dienvidu un rietumu blotēšana. Blotēšanas procesam piemērotas membrānas izvēle ir rūpīgi jāveic, lai novērstu nespecifisku saistīšanos un nepareizu noteikšanu. Nitroceluloze, neilons un PVDF parasti tiek izmantotas blotēšanas metodēs. Viņiem ir dažādas īpašības. Galvenā atšķirība starp nitrocelulozi un neilona membrānu ir tāda, ka nitrocelulozes membrānām ir augsts olb altumvielu imobilizācijas potenciāls, turpretim neilona membrānām ir augsts nukleīnskābju imobilizācijas potenciāls. Tomēr blotēšanas metodēs bieži izmanto abu veidu membrānas.
Kas ir nitrocelulozes membrāna?
Nitrocelulozes membrāna ir plaši izmantots membrānas filtrs nukleīnskābju un proteīnu blotēšanas metodēs. Tam ir augsts proteīnu saistīšanās potenciāls. Tādējādi nitrocelulozes membrānas plaši izmanto Western blotēšanas tehnikā. Nitrocelulozes membrānas ir savietojamas ar visiem hibridizācijas paņēmieniem, un tām ir izcilas saistīšanās spējas bez traucējumiem. Nitrocelulozes membrānas ir dabiski hidrofilas. Tie veido hidrofilu mijiedarbību ar molekulām un efektīvi imobilizē tās uz membrānas. Komerciālās nitrocelulozes membrānas ir pieejamas divos poru izmēros: 0,45 un 0,2 µm.
Attēls 01: Western blotēšanai izmantotā nitrocelulozes membrāna
Kas ir neilona membrāna?
Neilona membrāna ir cita veida komerciāla membrāna, ko izmanto blotēšanas paņēmienos. To alternatīvi izmanto ar nitrocelulozes membrānām dienvidu un ziemeļu blotēšanai. Neilona membrānas ir ideāli piemērotas dienvidu blotēšanai nekā nitroceluloze, jo tām ir augsta afinitāte pret saistīšanos ar DNS. Pateicoties vairākām unikālām neilona membrānu īpašībām, pētnieki parasti izmanto neilona membrānas dienvidu un ziemeļu blotēšanai, nevis virs nitrocelulozes membrānas. Atšķirībā no nitrocelulozes, neilona membrānas ir ieteicamas arī noņemšanai un atkārtotai zondēšanai.
Attēls 02: Neilona membrāna, ko izmanto dienvidu blotēšanai
Kāda ir atšķirība starp nitrocelulozi un neilona membrānu?
Nitroceluloze pret neilona membrānu |
|
| Nitrocelulozes membrānas ir trauslas. | Neilona membrānas ir mazāk trauslas. |
| Apstrāde | |
| Tās ir grūti apstrādāt. | Tās ir viegli apstrādājamas. |
| Reprobing | |
| Neatbalstītas nitrocelulozes membrānas ir grūti atkārtoti pārbaudīt. | Atkārtota zondēšana ir vienkārša, izmantojot neilona membrānas. |
| Saderība ar dažādiem uzglabāšanas apstākļiem | |
| Nitrocelulozes membrānām ir mazāka izturība, lai izturētu dažādus uzglabāšanas apstākļus. | Neilona membrānas izturīgāk reaģē uz dažādiem uzglabāšanas apstākļiem. |
| Izmantot | |
| Ir nepieciešama iepriekšēja samitināšana. | Nailona membrānām nav nepieciešama iepriekšēja samitināšana. |
| Hidrofila daba | |
| Nitrocelulozes membrānas pēc būtības ir hidrofilas, taču tās ir mazāk hidrofilas nekā neilona membrānas. | Tiem ir ļoti hidrofils raksturs. |
| Imobilizācijas potenciāls | |
| Nitrocelulozes membrānām ir mazāka afinitāte pret nukleīnskābēm. Bet tai ir augsta afinitāte pret olb altumvielām. | Neilona membrānām ir augsts saistīšanās potenciāls ar nukleīnskābēm nekā nitrocelulozes membrānām. |
Kopsavilkums - nitroceluloze pret neilona membrānu
Nitrocelulozes un neilona membrānas ir īpašas loksnes, ko izmanto blotēšanas tehnikā, lai uz želejas atveidotu joslu rakstu. Tie nodrošina iespēju no maisījumiem noteikt noteiktu secību vai proteīnu, imobilizējot tos uz membrānas. Kad molekulas ir imobilizētas uz membrānas, to var izmantot kā substrātu hibridizācijas analīzei ar iezīmētām zondēm. Nitrocelulozes membrānu parasti izmanto proteīnu noteikšanai Western blot tehnikā, jo tai ir augsta saistīšanās afinitāte ar olb altumvielām. Neilona membrānas bieži izmanto dienvidu un ziemeļu blotēšanai. Šī ir atšķirība starp nitrocelulozi un neilona membrānu.
