Galvenā atšķirība starp izokrātisko un gradienta eluēšanu ir tāda, ka izokrātiskā eluēšana attiecas uz nemainīgas koncentrācijas uzturēšanu kustīgajā fāzē, savukārt gradienta eluēšana attiecas uz mainīgas koncentrācijas saglabāšanu kustīgajā fāzē.
Hromatogrāfijā tiek lietoti termini izokrātiskā un gradienta eluēšana. Hromatogrāfijas laikā mēs izmantojam stacionāro fāzi, kas ir nekustīga viela, kopā ar mobilo fāzi, kustīgo vielu. Izokrātiskā un gradienta eluēšana apraksta kustīgās fāzes īpašības.
Kas ir izokrātiskā eluēšana?
Izokrātiskā eluēšana ir termins, ko lieto hromatogrāfijā, ja kustīgajai fāzei ir nemainīga koncentrācija. Šeit mobilās fāzes koncentrācija ir nemainīga visā hromatogrāfijas procesā. Šajā procesā mēs varam novērot pīķa platumu, kas lineāri palielinās līdz ar aiztures laiku hromatogrammā. Tomēr tas rada trūkumu – vēlīnās eluēšanas pīķi vēlīnā eluēšanā kļūst ļoti plakani un plati. Tāpēc šīs plašās virsotnes kļūst grūti atpazīt kā virsotnes.
Turklāt izokrātiskā eluēšanā selektivitāte nemainās atkarībā no kolonnas izmēriem. Tas nozīmē, ka selektivitāte nav atkarīga no kolonnu izmēru izmaiņām. Šeit garums un diametrs tiek uzskatīti par kolonnas izmēriem. Tāpēc pīķi eluē tādā pašā secībā.
Kas ir gradienta eluēšana?
Gradienta eluēšana ir termins, ko lieto hromatogrāfijā, kad kustīgajai fāzei ir mainīga koncentrācija. Citiem vārdiem sakot, mobilās fāzes koncentrācijai nav jāpaliek nemainīgai. Piemēram, HPLC parastā atdalīšanas metode sākotnēji izmanto 10% metanolu un beidzas ar 90%, pakāpeniski palielinot koncentrāciju. Mobilajai fāzei ir divas sastāvdaļas: vājš šķīdinātājs un spēcīgs šķīdinātājs. Vājš šķīdinātājs ļauj izšķīdušajai vielai eluēt lēni, savukārt spēcīgs šķīdinātājs izraisa izšķīdušās vielas ātru eluāciju. Apgrieztās fāzes hromatogrāfijā mēs izmantojam ūdeni kā vāju šķīdinātāju un organisko šķīdinātāju kā stipro šķīdinātāju.
Attēls 01: HPLC
Turklāt gradienta eluēšanas metode samazina vēlāk eluējošos komponentus, lai tie eluētos ātrāk, tādējādi hromatogrammā iegūstot šauru maksimumu. Šī metode uzlabo arī pīķa formu un pīķa augstumu. Turklāt gradienta eluēšanas tehnikā eluēšanas secība mainās, mainoties kolonnas izmēriem.
Kāda ir atšķirība starp izokrātisko un gradienta eluēšanu?
Hromatogrāfijā tiek lietoti termini izokrātiskā un gradienta eluēšana. Izokrātiskā un gradienta eluēšana apraksta kustīgās fāzes īpašības. Galvenā atšķirība starp izokrātisko un gradienta eluēšanu ir tāda, ka izokrātiskā eluēšana attiecas uz nemainīgas koncentrācijas uzturēšanu kustīgajā fāzē, turpretim gradienta eluēšana attiecas uz mainīgas koncentrācijas uzturēšanu kustīgajā fāzē.
Izokrātiskās eluēšanas tehnikā pīķa platums lineāri palielinās līdz ar aiztures laiku. Tomēr gradienta eluēšanas tehnikā vēlāk eluējošo komponentu aizture tiek samazināta, tādējādi eluēšana kļūst ātrāka un rada šauras virsotnes. Turklāt izokrātiskajā eluēšanā selektivitāte nav atkarīga no kolonnas izmēriem, bet gradienta eluēšanā selektivitāte mainās, mainoties kolonnas izmēriem.
Šajā tabulā ir apkopota atšķirība starp izokrātisko un gradienta eluēšanu.
Kopsavilkums - izokrātiskā vs gradienta eluēšana
Izokrātiskā eluēšana un gradienta eluēšana apraksta kustīgās fāzes īpašības. Galvenā atšķirība starp izokrātisko un gradienta eluēšanu ir tāda, ka izokrātiskā eluēšana attiecas uz nemainīgas koncentrācijas uzturēšanu kustīgajā fāzē, turpretim gradienta eluēšana attiecas uz mainīgas koncentrācijas uzturēšanu kustīgajā fāzē.
