Galvenā atšķirība starp afinitātes un jonu apmaiņas hromatogrāfiju ir tāda, ka mēs varam izmantot afinitātes hromatogrāfiju, lai maisījumā atdalītu uzlādētus vai neuzlādētus komponentus, turpretim mēs varam izmantot jonu apmaiņas hromatogrāfiju, lai maisījumā atdalītu uzlādētus komponentus.
Hromatogrāfija ir metode, ko varam izmantot, lai maisījumā atdalītu vēlamās sastāvdaļas. Ir dažādi veidi, piemēram, šķidruma hromatogrāfija, gāzu hromatogrāfija utt. Afinitātes hromatogrāfija un jonu apmaiņas hromatogrāfija ir divas šķidrumu hromatogrāfijas apakškategorijas. Turklāt šajās tehnikās ir divas fāzes. Proti, tās ir stacionārā fāze un mobilā fāze. Šo metožu mērķis ir atdalīt komponentus atkarībā no komponentu saistīšanās mobilajā fāzē uz stacionārās fāzes virsmas.
Kas ir afinitātes hromatogrāfija?
Afinitātes hromatogrāfija ir bioķīmiska metode, ko izmantojam, lai atdalītu komponentus maisījumā atkarībā no šo komponentu mijiedarbības.
Šajā gadījumā izmantojamās mijiedarbības ir šādas:
- Antigēna un antivielu mijiedarbība
- Enzīmu un substrāta mijiedarbība
- Receptoru-ligandu mijiedarbība
- Olb altumvielu un nukleīnskābju mijiedarbība
Šajā tehnikā mēs izmantojam molekulu molekulārās īpašības šai atdalīšanas tehnikai. Šeit mēs ļaujam vēlamajam savienojumam mijiedarboties ar stacionāru fāzi, izmantojot ūdeņraža saiti, jonu mijiedarbību, disulfīdu tiltus, hidrofobu mijiedarbību utt. Molekulas, kas nesadarbojas ar stacionāro fāzi, vispirms eluēsies. Tādējādi mēs varam to atdalīt no maisījuma. Vēlamais savienojums paliks pievienots stacionārajai fāzei. Tāpēc mēs varam to atdalīt, izmantojot eluējošu šķīdinātāju, un padarīt to eluētu, lai to arī atdalītu.
Attēls 01: Hromatogrāfiska kolonna
Afinitātes hromatogrāfija ir noderīga vielas attīrīšanai un koncentrēšanai no maisījuma, izmantojot buferšķīdumu. Tas arī palīdz samazināt nevēlamo vielu daudzumu maisījumā. Apsverot aparātu, ko mēs izmantojam šim procesam, mums vajadzētu izmantot kolonnu, kas piepildīta ar mūsu stacionāro fāzi. Pēc tam mums jāielādē mobilā fāze, kas satur biomolekulas, kuras mēs atdalīsim. Pēc tam ļaujiet tiem saistīties ar stacionāro fāzi. Pēc tam, izmantojot mazgāšanas buferi, mēs varam atdalīt nemērķa biomolekulas, taču mērķa molekulām jābūt ar augstu afinitāti pret stacionāro fāzi, lai atdalīšanas process būtu veiksmīgs.
Kas ir jonu apmaiņas hromatogrāfija?
Jonu hromatogrāfija ir šķidruma hromatogrāfijas veids, kurā mēs varam analizēt jonu vielas. Bieži vien mēs to izmantojam, lai analizētu neorganiskos anjonus un katjonus (t.i., hlorīda un nitrāta anjonus un kālija, nātrija katjonus). Lai gan tas ir retāk sastopams, mēs varam analizēt arī organiskos jonus. Turklāt mēs varam izmantot šo paņēmienu proteīnu attīrīšanai, jo olb altumvielas ir uzlādētas molekulas pie noteiktām pH vērtībām. Šeit mēs izmantojam cietu stacionāru fāzi, kurai var pievienoties uzlādētās daļiņas. Piemēram, mēs varam izmantot sveķu polistirola-divinilbenzola kopolimērus kā cieto balstu.
Attēls 02: Jonu apmaiņas hromatogrāfijas fāzes
Lai to sīkāk izskaidrotu, stacionārajā fāzē ir fiksēti joni, piemēram, sulfāta anjoni vai kvartārie amīnu katjoni. Katram no tiem vajadzētu būt saistītiem ar pretjonu (jonu ar pretēju lādiņu), ja mēs vēlamies saglabāt šīs sistēmas neitralitāti. Šeit, ja pretjons ir katjons, tad sistēmu nosaucam par katjonu apmaiņas sveķiem. Bet, ja pretjons ir anjons, sistēma ir anjonu apmaiņas sveķi.
Jonu apmaiņas procesā ir piecas galvenās fāzes;
- Sākotnējais posms
- Mērķa adsorbcija
- Elucijas sākums
- Elucijas beigas
- Reģenerācija
Kāda ir atšķirība starp afinitātes un jonu apmaiņas hromatogrāfiju?
Afinitātes hromatogrāfija ir bioķīmiska metode, ko izmantojam, lai atdalītu komponentus maisījumā atkarībā no mijiedarbības starp šiem komponentiem, turpretim jonu hromatogrāfija ir šķidruma hromatogrāfijas veids, kurā varam analizēt jonu vielas. Tāpēc galvenā atšķirība starp afinitātes un jonu apmaiņas hromatogrāfiju ir tā, ka jonu apmaiņas hromatogrāfiju varam izmantot tikai jonu vielu atdalīšanai, savukārt afinitātes hromatogrāfijā ir iespējams atdalīt gan uzlādētas, gan neuzlādētas daļiņas. Apsverot darbības principu, atšķirība starp afinitātes un jonu apmaiņas hromatogrāfiju ir tāda, ka afinitātes hromatogrāfija notiek tāpēc, ka mērķa molekulām ir augsta afinitāte pret stacionāro fāzi. Tomēr jonu apmaiņas hromatogrāfijā mērķa molekulām ir pretējs lādiņš stacionārās fāzes virsmas lādiņam.
Tālāk esošajā infografikā ir parādīta atšķirība starp afinitātes un jonu apmaiņas hromatogrāfiju kā līdzsvarotu salīdzinājumu.
Kopsavilkums - afinitātes un jonu apmaiņas hromatogrāfija
Rezumējot, afinitātes un jonu apmaiņas hromatogrāfija ir divi šķidrumu hromatogrāfijas metožu veidi. Galvenā atšķirība starp afinitātes un jonu apmaiņas hromatogrāfiju ir tāda, ka mēs varam izmantot afinitātes hromatogrāfiju, lai maisījumā atdalītu lādētus vai neuzlādētus komponentus, turpretim mēs varam izmantot jonu apmaiņas hromatogrāfiju, lai maisījumā atdalītu uzlādētus komponentus.
