Transformācija pret transfekciju
Transformācija un transfekcija ir divas vienkāršas metodes, ko izmanto, lai saimniekšūnā ievadītu svešu gēnu. Tomēr šīs metodes ir atkarīgas no resursdatora vai vektoru sistēmas veida.
Kas ir šūnu transformācija?
Transformācija ir paņēmiens, ko izmanto gēnu ievadīšanai rauga un baktēriju šūnās. Šis paņēmiens parasti izraisa iedzimtas izmaiņas gēnos, un tādējādi gēna ekspresija ir pastāvīga. Pirmo reizi baktēriju transformāciju 1928. gadā ieviesa Frederiks Grifits. Tad 1970. gadu sākumā šo paņēmienu izmantoja E.coli. E. coli transformācijas procesa laikā šūnas tiek mērcētas ledusaukstā CaCl šķīdumā2 Šis solis padara E.coli šūnas kompetentas. Pēc tam kompetentās šūnas sajauc ar plazmīdas DNS un inkubē uz ledus 20-30 minūtes. Pēc tam tiek veikts īss karstuma šoks, lai nodrošinātu DNS pārnešanu šūnā. Visbeidzot, šūnas ievieto barības vielu buljonā un inkubē 37 ° C temperatūrā 60–90 minūtes, lai izveidotu plazmīdas. Kad šīs darbības ir veiksmīgi pabeigtas, transformētās šūnas var novietot uz piemērotu barotni šūnu pavairošanai. Tā kā transformācija tiek uzskatīta par neefektīvu paņēmienu, to nedrīkst izmantot klonu banku sagatavošanai.
Kas ir šūnu transfekcija?
Transfekcija ir sveša gēna ievadīšanas metode, parasti zīdītāju šūnās. Ir divas transfekcijas metodes; proti, pārejoša transfekcija un stabila transfekcija. Īslaicīgas transfekcijas gadījumā gēnu ekspresija ir pieejama ierobežotu laiku; tādējādi gēna izmaiņas izraisa īslaicīgu ekspresiju. Šī transfekcijas metode ir vienkārša un ātra; tāpēc to var izmantot regulāri. Viens pārejošas transfekcijas trūkums ir grūtības izmantot liela mēroga proteīnu sintēzes sistēmas.
Stabilas transfekcijas laikā mērķa gēns tiek integrēts saimniekšūnas genomā, un tādējādi gēna ekspresija ir pastāvīga, atšķirībā no pārejošas transfekcijas.
Kāda ir atšķirība starp transformāciju un transfekciju?
• Transformācija ir gēna ievadīšana prokariotu šūnā (baktēriju un rauga šūnā), turpretim transfekciju parasti sauc par gēna ievadīšanu zīdītāju šūnā.
• Transformācijas rezultātā rodas iedzimtas izmaiņas gēnos, savukārt transfekcija var izraisīt vai nu īslaicīgu ekspresiju, vai pastāvīgas izmaiņas gēnos.
