Galvenā atšķirība starp rauga viens hibrīdu un rauga divi hibrīdu ir tāda, ka rauga viens hibrīds ir in vitro tests, lai analizētu DNS un proteīna mijiedarbību, savukārt rauga divi hibrīds ir in vitro tests, lai analizētu proteīnu un olb altumvielu mijiedarbību.
Šūnu molekulu mijiedarbības izpēte var palīdzēt noteikt atpazīšanas vietas, kas iesaistītas gēnu ekspresijā un proteīnu ceļos. DNS un proteīnu mijiedarbība ir neatņemama šūnu procesu sastāvdaļa, piemēram, DNS modifikācijas un transkripcijas regulēšana utt. No otras puses, proteīnu un olb altumvielu mijiedarbībai ir būtiska nozīme šūnu procesos, piemēram, replikācijā, transkripcijā, translācijā un signālu pārraidē. Tāpēc ir ļoti svarīgi identificēt šīs šūnu molekulu mijiedarbības, izmantojot dažādus testus. Raugs viens hibrīds un Raugs divi hibrīds ir divi in vitro testi, lai analizētu DNS-olb altumvielas un proteīna-olb altumvielas mijiedarbības.
Kas ir Yeast One Hybrid?
Yeast one hibrīds (Y1H) ir in vitro balstīts tests, lai analizētu intracelulāro DNS-olb altumvielu mijiedarbību. Šo metodi pirmo reizi ieviesa Vans un Rīds 1993. gadā. Kopš tā laika tā ir izrādījusi lielāku spēku bioloģiskajos pētījumos. Šajā pārbaudē ir divas galvenās sastāvdaļas: DNS ēsma un proteīnu upuri.
Attēls 01: Yeast One Hybrid
Procedūrā DNS sekvence (DNS ēsma) vispirms tiek klonēta pirms diviem dažādiem reportieriem (HIS3, LacZ). Šīs reportieru konstrukcijas ir integrētas rauga celma genomā. Transkripcijas faktori tiek uzskatīti par proteīnu laupījumu. Lai izveidotu hibrīda proteīnus, transkripcijas faktori tiek sapludināti ar rauga Gal4 transkripcijas faktora transkripcijas aktivācijas domēnu (AD). Šis viss hibrīda proteīns tiek integrēts plazmīdā pirms tā ievadīšanas rauga celmā. Pēc rekombinantās plazmīdas ievadīšanas, kad transkripcijas faktors mijiedarbojas ar DNS fragmentu, AD daļa aktivizē reportiera gēna ekspresiju (HIS3 vai LacZ). Plazmīdu sekvencēšana ļauj identificēt transkripcijas faktoru, kas var saistīties ar DNS fragmentu. Nesen slimību diagnostikas pētīšanai tika izmantota rauga viena hibrīda metode. Tāpēc nākotnē šo testu plašāk izmantos zinātniskajā izpētē un ārstniecībā.
Kas ir Yeast Two Hybrid?
Yeast Two hybrid (Y2H) ir in vitro balstīts tests, lai analizētu intracelulāro proteīnu un olb altumvielu mijiedarbību. Šo metodi 1989. gadā sākotnēji atrada Stenlijs Fīldss un Ok-Kju Song. Šis paņēmiens nosaka olb altumvielu un olb altumvielu mijiedarbību, izmantojot rauga transkripcijas faktoru Gal4.
Attēls 02: Yeast Two Hybrid
Šajā metodē vispirms tiek konstruēti divi saplūšanas savienojumi (hibrīdi), izmantojot interesējošos proteīnus: sapludinot vienu proteīnu ar DNS saistošo domēnu (DBD) un sapludinot otru proteīnu ar Gal4 transkripcijas faktora aktivatora domēnu (AD).. Proteīns, kas sakausēts ar DBD, ir pazīstams kā ēsma, savukārt proteīns, kas sakausēts ar AD, ir pazīstams kā laupījums. Rauga celmā pēc ēsmas un laupījuma mijiedarbības DBD un AD tiek nogādāti tiešā tuvumā, lai ģenerētu funkcionālu Gal4 transkripcijas faktoru augšpus reportiera gēna. Funkcionālais transkripcijas faktors aktivizē reportiera gēnu ekspresiju. Turklāt šo metodi pašlaik izmanto, lai pārbaudītu integrālo membrānas proteīnu mijiedarbību zīdītāju šūnās.
Kādas ir līdzības starp Yeast One Hybrid un Yeast Two Hybrid?
- Yeast one hibrīds un yeast two hibrīds ir divi in vitro testi, lai analizētu DNS-olb altumvielu un proteīnu-olb altumvielu mijiedarbību.
- Šajos testos tiek izmantoti rauga celmi.
- Abos testos tiek izmantots Gal4 transkripcijas faktora aktivizācijas domēns (AD).
- Tie izmanto reportiera gēna (HIS3 vai LacZ) izteiksmi, lai noteiktu mijiedarbību.
- Viņiem ir ēsma un laupījums.
- Abi testi ir ļoti noderīgi mūsdienu bioloģiskajos pētījumos.
Kāda ir atšķirība starp Yeast One Hybrid un Yeast Two Hybrid?
Yeast one hibrīds ir in vitro balstīts tests, lai analizētu DNS un proteīnu mijiedarbību, savukārt rauga divi hibrīds ir in vitro tests, lai analizētu olb altumvielu un olb altumvielu mijiedarbību. Tādējādi šī ir galvenā atšķirība starp rauga viena hibrīda un rauga divu hibrīdu. Turklāt vienā rauga hibrīdā ēsma ir DNS fragments, bet laupījums ir proteīna molekula. No otras puses, rauga divos hibrīdos gan ēsma, gan laupījums ir olb altumvielu molekulas.
Tālāk esošajā infografikā tabulas veidā ir norādītas atšķirības starp rauga viena hibrīda un rauga divi hibrīda hibrīdiem, lai salīdzinātu līdzās.
Kopsavilkums - Yeast One Hybrid vs Yeast Two Hybrid
Yeast one hibrīds un yeast two hibrīds ir divi svarīgi in vitro testi. Raugs viens hibrīds ir in vitro balstīts tests, lai analizētu DNS un olb altumvielu mijiedarbību, savukārt rauga divi hibrīds ir in vitro balstīts tests, lai analizētu olb altumvielu un olb altumvielu mijiedarbību. Tādējādi šī ir galvenā atšķirība starp rauga viena hibrīda un rauga divu hibrīdu.
