Galvenā atšķirība starp saharozes gradientu un saharozes spilvena ultracentrifugēšanu ir tāda, ka saharozes gradienta ultracentrifugēšanā tiek izmantots nepārtraukts saharozes gradients, savukārt saharozes spilvena ultracentrifugēšanā tiek izmantots pārtraukts saharozes gradients.
Saharozes gradienta un saharozes spilvena ultracentrifugēšana ir divi līdzīgi paņēmienu veidi, ko izmanto, lai atdalītu noteikta veida makromolekulas. Abās tehnikās tiek izmantots saharozes blīvuma gradients. Bet saharozes gradienta ultracentrifugēšanā izmanto nepārtrauktu blīvuma gradientu, savukārt saharozes spilvena ultracentrifugēšanā izmanto pārtrauktu blīvuma gradientu.
Kas ir saharozes gradienta ultracentrifugēšana?
Saharozes gradienta ultracentrifugēšana ir metode, ko var izmantot, lai frakcionētu makromolekulas, piemēram, DNS, RNS un proteīnus. Šajā tehnikā ir vairāki soļi. Tie ir saharozes gradienta sagatavošana, centrifugēšana, atdalīšana un eluēšana. Gradienta sagatavošana ir šīs tehnikas galvenais solis. Šajā tehnikā paraugs, kas satur dažāda izmēra makromolekulas, tiek uzklāts uz saharozes gradienta kolonnas virsmas. Centrifugējot, dažāda lieluma makromolekulas nogulsnējas caur saharozes gradienta kolonnu dažādos ātrumos. Sedimentācija ir atkarīga no vairākiem faktoriem, tostarp centrifugēšanas spēka, lieluma formas un makromolekulu blīvuma, gradienta blīvuma un viskozitātes. Centrifugēšanas beigās makromolekulas tiek telpiski atdalītas pēc blīvuma. Lielākas makromolekulas (augsta blīvuma makromolekulas) nogulsnējas virzienā uz leju. Gaišākas (maza blīvuma makromolekulas) paliek gradienta augšpusē. Tāpēc molekulas atdalās kā dažādas joslas. Pēc tam joslas ir jāatdala un jāveic konkrētās makromolekulas attīrīšana no saharozes.
Attēls 01: saharozes gradienta ultracentrifugēšana
Lietošanas pusē šī metode tiek plaši izmantota DNS molekulu frakcionēšanai. Saharozes gradienta ultracentrifugēšanu parasti izmanto, lai raksturotu olb altumvielu kompleksa lielumu un sastāvu. Turklāt šo paņēmienu izmanto mRNS daļējai attīrīšanai.
Kas ir saharozes spilvena ultracentrifugēšana?
Ultracentrifugēšana ar saharozes spilvenu ir vēl viens paņēmiens, kas ļauj frakcionēt makromolekulas. Atšķirībā no saharozes blīvuma gradienta ultracentrifugēšanas, saharozes spilvena ultracentrifugācijā tiek izmantots nepārtraukts blīvuma gradients. Saharozes koncentrācija palielinās no augšas uz leju ar diskrētiem soļiem. Izmantojot šo paņēmienu, atdalīšanu panāk, dzidrināto ekstraktu ievietojot virs neliela apjoma saharozes šķīduma centrifūgas mēģenē, tā sauktajā saharozes spilventiņā. Tas nodrošina labāku atdalīšanu ātrgaitas centrifugēšanā. Kad molekulas atdalās kā josla starp saharozes spilvenu, b alto joslu var savākt un attīrīt. Turklāt piemaisījumus var tālāk noņemt, izmantojot saharozes spilvena metodi. Saharozes spilvena metode ļauj 60-70% no mēģenes piepildīt ar paraugu. Tādējādi saharozes spilvena metode ļauj apstrādāt lielāku parauga daudzumu.
Kādas ir līdzības starp saharozes gradientu un saharozes spilvena ultracentrifugēšanu?
- Saharozes gradienta un saharozes spilvena ultracentrifugēšana ir divas metodes, ko izmanto makromolekulu maisījuma atdalīšanai.
- Abās metodēs tiek izmantots saharozes gradients.
- Centrifugēšana ir solis abās metodēs.
- Katrā metodē molekulas nogulsnējas kā josla vai zona.
Kāda ir atšķirība starp saharozes gradientu un saharozes spilvena ultracentrifugēšanu?
Saharozes gradienta ultracentrifugēšana ir metode, kas izmanto nepārtrauktu saharozes gradientu centrifūgas mēģenē, savukārt saharozes spilvena ultracentrifugēšana ir metode, kurā tiek izmantots pārtraukts saharozes gradients. Tādējādi šī ir galvenā atšķirība starp saharozes gradientu un saharozes spilvena ultracentrifugēšanu.
Turklāt saharozes spilvena ultracentrifugēšana ļauj apstrādāt lielāku parauga tilpumu, savukārt saharozes gradienta ultracentrifugēšana ļauj apstrādāt salīdzinoši mazu parauga daudzumu.
Zemāk infografikā ir parādītas vairāk atšķirību starp saharozes gradientu un saharozes spilvena ultracentrifugēšanu.
Kopsavilkums - saharozes gradients pret saharozes spilvena ultracentrifugēšanu
Saharozes gradienta ultracentrifugēšana atdala makromolekulas, izmantojot nepārtrauktu saharozes gradientu. Turpretim saharozes spilvena ultracentrifugēšana izmanto pārtrauktu saharozes gradientu, lai maisījumā atdalītu noteikta veida daļiņas. Tātad, šī ir galvenā atšķirība starp saharozes gradientu un saharozes spilvena ultracentrifugēšanu. Saharozes spilvena metode ļauj savākt morfoloģiski neskartas daļiņas, jo tā neizraisa mehānisku spriegumu, atšķirībā no saharozes gradienta ultracentrifugēšanas, kas sasmalcina molekulas līdz mēģenes apakšai. Turklāt saharozes spilvena ultracentrifugēšana ļauj apstrādāt lielāku parauga tilpumu nekā saharozes gradienta ultracentrifugēšana.
