Galvenā atšķirība starp apgrieztās fāzes un normālās fāzes HPLC ir tāda, ka apgrieztās fāzes HPLC izmanto nepolāru stacionāro fāzi un polāro kustīgo fāzi, turpretim normālās fāzes HPLC izmanto polāro stacionāro fāzi un mazāk polāru kustīgu fāzi.
Normālās fāzes HPLC ir vecākā HPLC metode, ko Tsvets izmantoja augu ekstraktu atdalīšanai; viņš izmantoja krītu stikla kolonnā. Tas bija klasiskais hromatogrāfijas veids, kā rezultātā to nosauca par “parasto” tehniku. Savukārt apgrieztās fāzes HPLC ir pretējs parastajai tehnikai, ko zinātnieki izstrādāja pēdējā laikā.
Kas ir reversās fāzes HPLC?
Reversās fāzes HPLC ir hromatogrāfijas metode, kurā mēs izmantojam hidrofobu stacionāro fāzi. No visām HPLC metodēm mēs izmantojam šo metodi aptuveni 70% tās plašās pielietojamības un reproducējamības dēļ. Stacionārā fāze ir nepolāra, un kustīgā fāze ir polāra.
Lielākoties zinātnieki kā kustīgo fāzi izmanto ūdens ūdens maisījumu ar sajaucamu, polāru organisku šķīdinātāju, piemēram, acetonitrilu vai metanolu. Tāpēc analizējamās vielas mijiedarbojas ar nepolāro stacionāro fāzi.
Kas ir normālās fāzes HPLC?
Normālās fāzes HPLC ir hromatogrāfijas metode, kurā mēs izmantojam hidrofilo stacionāro fāzi. Tā ir tradicionālā HPLC metode, lai gan mēs to neizmantojam tik daudz. Stacionārā fāze ir polāra, un mobilā fāze ir nepolāra. Vēl svarīgāk ir tas, ka šīs tehnikas mobilā fāze ir 100% organiska. Tas nozīmē, ka šim nolūkam netiek izmantots ūdens.
Attēls 01: Parauga profils normālas fāzes un apgrieztās fāzes HPLC hromatogrammām atbilstoši analizējamā līdzekļa komponentu polaritātei.
Parasti stacionārajā fāzē ir silīcija dioksīds, ciānskābe, diols, ar aminoskābēm saistītās fāzes utt. Kustīgās fāzes ietver organiskos šķīdinātājus, piemēram, heksānu, etilacetātu utt. Šīs metodes pamatā ir šķīdinātāja vai analizējamo vielu molekulu aizturēšana polārā stacionārā fāze.
Kāda ir atšķirība starp reversās fāzes un normālās fāzes HPLC?
Reversās fāzes HPLC ir hromatogrāfijas metode, kurā mēs izmantojam hidrofobu stacionāro fāzi. Šīs metodes stacionārā fāze ir nepolāra, savukārt mobilā fāze ir polāra. Turklāt zinātnieki izmanto ūdens ūdens maisījumu ar sajaucamu, polāru organisku šķīdinātāju, piemēram, acetonitrilu vai metanolu, kā mobilo fāzi apgrieztās fāzes HPLC. Turpretim normālās fāzes HPLC ir hromatogrāfijas metode, kurā mēs izmantojam hidrofilu stacionāru fāzi. Šīs metodes stacionārā fāze ir polāra, savukārt mobilā fāze ir nepolāra. Papildus tam zinātnieki izmanto organiskos šķīdinātājus, piemēram, heksānu, etilacetātu utt., kā normālās fāzes HPLC kustīgo fāzi. Tālāk esošajā infografikā tabulas veidā parādīta atšķirība starp apgrieztās fāzes un normālās fāzes HPLC.
Kopsavilkums - apgrieztā fāze salīdzinājumā ar parasto fāzi HPLC
Apgrieztās fāzes un normālās fāzes HPLC metodes ir divas šķidruma hromatogrāfijas metodes. Galvenā atšķirība starp apgrieztās fāzes un normālās fāzes HPLC ir tāda, ka apgrieztās fāzes HPLC izmanto nepolāru stacionāro fāzi un polāro kustīgo fāzi, savukārt normālās fāzes HPLC izmanto polāro stacionāro fāzi un mazāk polāru mobilo fāzi.
