Galvenā atšķirība starp Klenova fragmentu un DNS polimerāzi 1 ir tāda, ka Klenova fragments ir liela daļa DNS polimerāzes 1, kurai trūkst 5′ līdz 3′ eksonukleāzes aktivitātes, savukārt DNS polimerāze ir E. coli enzīms, kam ir visi trīs domēni, tostarp 5′ līdz 3′ eksonukleāzes aktivitāte.
DNS polimerāze ir viens no galvenajiem fermentiem, kas iesaistīti DNS replikācijā dzīvos organismos. Eikariotos un prokariotos ir dažādas DNS polimerāzes enzīma formas, pamatojoties uz izmēru un formu. DNS polimerāze 1, 2 un 3 ir atrodamas tikai prokariotu organismos, un tām ir atšķirīga loma DNS replikācijā. DNS polimerāzei 1 ir trīs domēni ar 5′ līdz 3′ polimerāzes, 3′ līdz 5′ eksonukleāzes aktivitāti un 5′ līdz 3′ eksonukleāzes aktivitāti. Klenova fragments ir DNS polimerāzes 1 proteolītisks produkts. Tam piemīt 5 līdz 3′ polimerāzes un 3′ līdz 5′ eksonukleāzes aktivitātes kā neskartas DNS polimerāzes 1, bet tam trūkst 5′ līdz 3′ eksonukleāzes aktivitātes.
Kas ir Klenova fragments?
Klenova fragments ir liela daļa no DNS polimerāzes 1. Atšķirībā no DNS polimerāzes 1, Klenova fragmentā nav redzama 5′ līdz 3′ eksonukleāzes aktivitāte, jo tam trūkst 5′ līdz 3′ priekšējās eksonukleāzes domēna. Klenova fragmentus iegūst, sagremot DNS polimerāzi 1 ar proteāzi, ko sauc par subtilizīnu, kas ir proteīnu sagremojošs enzīms. Dažos lietojumos Klenova fragmenta 3′ līdz 5′ eksonukleāzes aktivitāte kļūst nevēlama. To var noņemt, ieviešot mutāciju gēnā, kas kodē Klenova fragmentu. Iegūtais enzīms, kuram ir tikai 5′ līdz 3′ polimerāzes aktivitāte, ir pazīstams kā ekso-Klenova fragments. Morfoloģiski Klenova fragments atgādina cilvēka labo roku. Tam ir N-gala 3′-5′ eksonukleāzes domēns un C-termināla polimerāzes domēns, kas atdalīts ar aptuveni 30 A.
Attēls 01: Klenova fragments un DNS polimerāze 1
Klenovas fragments ir svarīgs līdzeklis molekulāri bioloģiskajās tehnikās. Klenovas fragmentiem ir vairākas izmantošanas iespējas. Tie ir ārkārtīgi svarīgi klonēšanai ar neasu galu, lai iegūtu neasus fragmentus. Klenow fragmenti var noņemt 3′ pārkares vai aizpildīt 5′ pārkares, veidojot neasus galus. Turklāt Klenova fragmenti tiek izmantoti, lai sintezētu divpavedienu DNS no vienas virknes. Turklāt tos izmanto, lai sagatavotu radioaktīvi iezīmētas zondes, izmantojot no 5' līdz 3' DNS atkarīgo DNS polimerāzes aktivitāti.
Kas ir DNS polimerāze 1?
DNS polimerāze 1 (Pol 1) ir enzīms, kas atrodams prokariotos un ir nepieciešams baktēriju DNS replikācijai. Tas ir pirmais DNS polimerāzes veids, ko 1956. gadā atklāja Arturs Kornbergs. Pol 1 ir visizplatītākā polimerāze E. coli. To kodē gēns polA un sastāv no 928 aminoskābēm. Tas sastāv no trim domēniem. Visi trīs domēni pilda atšķirīgas funkcijas. Divi domēni veic 5′ līdz 3′ eksonukleāzes aktivitāti un 3′ līdz 5′ eksonukleāzes aktivitāti. Pateicoties šai Pol 1 aktivitātei, tas ir populārs kā DNS labojošs enzīms, nevis DNS replikācijas enzīms. Trešajam domēnam ir iespēja katalizēt vairākas polimerizācijas (no 5′ līdz 3′) pirms veidnes DNS atbrīvošanas un Okazaki fragmentu savienošanas kopā, aizpildot jaunu DNS un noņemot RNS primerus.
2. attēls: DNS polimerāze
Pol 1, kas izolēts no E Coli, tika plaši izmantots molekulāros lietojumos. Tomēr, tiklīdz Taq Polymerase tika atklāta, tā PCR tehnoloģijā aizstāja E Coli Pol 1. Taq polimerāze ir termostabila DNS polimerāze, kas pieder Pol 1.
Kādas ir Klenovas fragmenta un DNS polimerāzes 1 līdzības?
- Klenova fragments ir liela daļa DNS polimerāzes 1.
- Tām ir no 5 līdz 3′ no DNS atkarīga DNS polimerāzes aktivitāte un no 3 līdz 5′ eksonukleāzes aktivitāte, kas ir starpnieks korektūru veikšanā.
- Tie tiek izmantoti vairākiem mērķiem.
Kāda ir atšķirība starp Klenova fragmentu un DNS polimerāzi 1?
Galvenā atšķirība starp Klenova fragmentu un DNS polimerāzi 1 ir tāda, ka Klenova fragmentam trūkst 5′ līdz 3′ eksonukleāzes aktivitātes, savukārt DNS polimerāzei 1 ir 5′ līdz 3′ eksonukleāzes aktivitāte. Tāpēc Klenova fragmentam ir divi domēni, savukārt DNS polimerāzei 1 ir visi trīs domēni.
Zemāk infografikā ir parādīta sīkāka informācija par atšķirību starp Klenova fragmentu un DNS polimerāzi 1.
Kopsavilkums - Klenovas fragments pret DNS polimerāzi 1
DNS polimerāze 1 ir E. coli enzīms, kam ir trīs domēni kā 5′ līdz 3′ polimerizācijas domēns, 3′ līdz 5′ eksonukleāzes domēns un 5′ līdz 3′ eksonukleāzes domēns. Klenova fragments ir liela DNS polimerāzes daļa. Tam trūkst viena DNS polimerāzes 1 domēna, kas ir 5′ līdz 3′ eksonukleāzes domēns. Galvenā atšķirība starp Klenova fragmentu un DNS polimerāzi 1 ir tāda, ka Klenova fragmentiem nav 5′ līdz 3′ eksonukleāzes domēna, savukārt DNS polimerāzei 1 ir 5′ līdz 3′ eksonukleāzes domēns.
