Galvenā atšķirība - imunofluorescence pret imūnhistoķīmiju
Slimību diagnostika, kurā tiek izmantotas molekulāri bioloģiskās metodes, ir kļuvusi par jaunu klīniskās laboratorijas tehnoloģiju jomu. Tajā ir iekļauti visi testi un metodes, lai identificētu slimību un izprastu slimības cēloni, analizējot DNS, RNS vai izteiktos proteīnus organismā. Straujie sasniegumi molekulārajā diagnostikā ir ļāvuši veikt fundamentālus pētījumus par infekcijas un neinfekcijas slimībām. Tos izmanto, lai noteiktu izmaiņas sekvences vai ekspresijas līmeņos svarīgos gēnos vai proteīnos, kas saistīti ar slimību. Imunofluorescence (IF) un imūnhistoķīmija (IHC) ir divas tik plaši izmantotas metodes vēža bioloģijā. IF ir IHC veids, kurā monoklonālo un poliklonālo antivielu analīzei izmanto fluorescences noteikšanas metodi, savukārt IHC izmanto uz ķīmiskām metodēm balstītas metodes, lai noteiktu monoklonālās un poliklonālās antivielas. Šī ir galvenā atšķirība starp IF un IHC.
Kas ir imunofluorescence (IF)?
Imunofluorescence ir noteikšanas paņēmiens, kurā testā izmantotās antivielas tiek marķētas, noteikšanas nolūkā izmantojot fluorescējošas krāsvielas vai fluorescējošus proteīnus. Marķētas sekundārās antivielas var izraisīt nevēlamus fona signālus; tādēļ IF tehnika pašlaik ir balstīta uz pašas primārās antivielas marķēšanu, lai izvairītos no nevēlamiem signāliem noteikšanas laikā. Izmantojot šo paņēmienu, tiek novērsta nespecifiskā saistīšanās starp primāro un sekundāro antivielu, un tā notiek ātrāk, jo nav iesaistīta sekundārā inkubācijas stadija. Ir uzlabota arī datu kvalitāte.
Attēls 01: dubultā imunofluorescences krāsošana BrdU, NeuN un GFAP
Fluorohromi vai fluorescējošās krāsvielas ir savienojumi, kas var absorbēt starojumu, vēlams ultravioleto starojumu, kas ir ierosināts. Kad daļiņas no ierosinātā stāvokļa sasniedz pamatstāvokli, tās izstaro starojumu, ko uztver un nosaka detektors, veidojot spektru. Ir ļoti svarīgi, lai fluorescējošais marķējums būtu saderīgs un stabils konkrētajai reakcijai, un tas būtu pareizi konjugēts ar antivielu, lai iegūtu precīzus rezultātus. Viens no visbiežāk izmantotajiem fluorohromiem ir fluoresceīna izotiocianāts (FITC), kas ir zaļā krāsā ar absorbcijas un emisijas maksimālo viļņu garumu attiecīgi 490 nm un 520 nm. Rodamīns, vēl viens līdzeklis, ko izmanto IF, ir sarkanā krāsā, un tam ir atšķirīgi absorbcijas un emisijas viļņu garumi 553 nm un 627 nm.
Kas ir imūnhistoķīmija (IHC)?
IHC ir molekulārās testēšanas metode, ko izmanto, lai identificētu un apstiprinātu antigēna klātbūtni mērķa šūnā. Mērķa šūna var būt infekcioza daļiņa, mikrobu patogēns vai ļaundabīga audzēja šūna. IHC izmanto monoklonālās un poliklonālās antivielas, lai noteiktu antigēnu klātbūtni uz mērķa šūnu virsmas. Metodes pamatā ir saistīšanās ar antigēnu un antivielu. Ar šīm antivielām tiek konjugēts noteikšanas marķieris, lai noteiktu konkrētā antigēna klātbūtni vai neesamību. Šie marķieri var būt ķīmiski marķieri, piemēram, fermenti, fluorescējoši marķētas antivielas vai radioaktīvi iezīmētas antivielas.
2. attēls: ar imūnhistoķīmiju iekrāsota peles smadzeņu šķēle
Populārākais IHC pielietojums ir vēža šūnu bioloģijā, lai identificētu ļaundabīgu audzēju klātbūtni, taču to izmanto arī infekcijas slimību noteikšanai.
Kādas ir līdzības starp imunofluorescenci un imūnhistoķīmiju?
- Imunofluorescence un imūnhistoķīmija notiek in vitro apstākļos.
- Abu paņēmienu pamatā ir antigēns-antiviela
- Abas ir ļoti ātras metodes.
- Paņēmienu rezultāti ir reproducējami.
- Abām ierīcēm ir uzlabota datu kvalitāte.
- Šīs metodes, ko izmanto vēža un infekcijas slimību diagnostikā.
Kāda ir atšķirība starp imunofluorescenci un imūnhistoķīmiju?
Imunofluorescence pret imūnhistoķīmiju |
|
| IF ir noteikšanas paņēmiens, kurā testā izmantotās antivielas tiek marķētas, noteikšanai izmantojot fluorescējošas krāsvielas vai fluorescējošos proteīnus. | IHC ir noteikšanas paņēmiens, kurā testā izmantotās antivielas tiek marķētas, noteikšanai izmantojot ķīmiskas vielas vai radioaktīvos elementus. |
| Precizitāte | |
| Precizitāte ir augstāka IF tehnikā, salīdzinot ar IHC. | IHC precizitāte ir zemāka. |
| Specifika | |
| IF ir konkrētāks. | IHC ir mazāk specifisks. |
Kopsavilkums - imunofluorescence pret imūnhistoķīmiju
Molekulārie mehānismi ir radījuši daudzas izmaiņas medicīnas jomā, radot progresīvas molekulārās testēšanas metodes, kas izraisījušas revolūciju diagnostikas jomā. Šie izgudrojumi ir ļāvuši ātri un precīzi identificēt un apstiprināt slimību, tādējādi ļaujot veiksmīgi ievadīt un ražot zāles. Šīs metodes tiek izmantotas arī farmakoloģijā, lai atrastu zāļu mērķus un apstiprinātu zāļu farmakokinētiskās īpašības zāļu metabolisma laikā. IF un IHC ir divas diagnostikas metodes, kuru pamatā ir antigēna un antivielu saistīšanās koncepcija, lai gan noteikšanas veids abās metodēs atšķiras. IF izmanto fluorescences principu, lai noteiktu antigēnu, un IHC izmanto ķīmiskās konjugācijas jēdzienu, lai noteiktu antigēnu. Šī ir atšķirība starp IF un IHC.
Lejupielādēt imunofluorescences un imūnhistoķīmijas PDF versiju
Varat lejupielādēt šī raksta PDF versiju un izmantot to bezsaistē saskaņā ar atsauces piezīmi. Lūdzu, lejupielādējiet PDF versiju šeit Atšķirība starp imunofluorescenci un imūnhistoķīmiju.
