Galvenā atšķirība starp tiešo un netiešo imunofluorescenci ir tā, ka tiešā imunofluorescence izmanto vienu antivielu, kas darbojas pret interesējošo mērķi, savukārt netiešā imunofluorescence izmanto divas antivielas, lai marķētu interesējošo mērķi.
Imunofluorescence vai šūnu attēlveidošana ir metode, ko izmanto, lai ar fluoroforu marķētu konkrētu mērķa antigēnu. Šeit fluorofors ir fluorescējošs ķīmisks savienojums, kas pēc gaismas ierosmes var atkārtoti izstarot gaismu. Kad fluorofors saistās ar mērķa antigēnu, tas ļauj paraugā noteikt mērķa molekulu. Lai to tālāk aprakstītu, kad antigēns saistās ar specifisku antivielu, to var konjugēt ar fluoroforiem. Tādējādi, novērojot fluorescences mikroskopā, ir viegli noteikt mērķa antigēna klātbūtni paraugā.
Turklāt ir divu veidu imunofluorescence; tiešā un netiešā imunofluorescence. Atšķirība starp tiešo un netiešo imunofluorescenci galvenokārt slēpjas izmantoto antivielu skaitā un fluorofora konjugācijā. Tas ir, tiešā imunofluorescencē fluorofors tieši konjugējas ar primāro antivielu, savukārt netiešajā imunofluorescencē fluorofors konjugējas ar sekundāro antivielu.
Kas ir tiešā imunofluorescence?
Imunofluorescence izmanto antivielas, lai noteiktu specifiskus mērķa antigēnus. Tiešā imunofluorescence ir viens no diviem imunofluorescences veidiem. Tiešā imunofluorescencē tiek iesaistīta viena antiviela (primārā antiviela), un fluorofors tieši konjugējas ar primāro antivielu. Saistoties ar antivielu ar mērķa antigēnu, fluorofors izstaro fluorescenci, ko var noteikt ar fluorescences mikroskopu.
Attēls 01: tiešā imunofluorescence
Tomēr tiešā imunofluorescence ir dārga metode, jo primārās konjugētās antivielas ir dārgas salīdzinājumā ar sekundārajām antivielām. Tomēr tas neietver papildu soli, tātad, īsāku paņēmienu. Turklāt tiešā imunofluorescencē tiek samazināta nespecifiskā saistīšanās. Tādējādi sugu savstarpējā reaktivitāte ir zema. Bet noteikšanā tiešās imunofluorescences jutība ir vāja salīdzinājumā ar netiešo imunofluorescenci.
Kas ir netiešā imunofluorescence?
Netiešā imunofluorescence ir otrais imūnfluorescences veids, kas ietver divu veidu antivielas, piemēram, primārās un sekundārās antivielas mērķa antigēna marķēšanā. Šajā metodē fluorofors konjugējas ar sekundāro antivielu. Tādējādi šis paņēmiens ietver papildu darbību.
2. attēls: imunofluorescence
Tomēr šīs metodes jutīgums ir augsts, jo vairākus fluoroforus var konjugēt ar sekundārajām antivielām, un tas atvieglo noteikšanu. Turklāt netiešā imunofluorescence ir lētāka, jo sekundāro antivielu konjugācija ir lētāka un vienkāršāka. Salīdzinot ar tiešo imunofluorescenci, sugas krusteniskā reaktivitāte netiešajā metodē ir augsta.
Kādas ir tiešās un netiešās imunofluorescences līdzības?
- Tie ir divu veidu imunofluorescences tehnika.
- Primārās antivielas un fluorofors ir iesaistīti abās metodēs.
- Arī antigēna-antivielu reakcija notiek abās metodēs.
- Turklāt gan tiešā, gan netiešā imunofluorescence izmanto fluorescences mikroskopu, lai noteiktu antigēnu.
Kāda ir atšķirība starp tiešo un netiešo imunofluorescenci?
Imunofluorescence var būt tieša vai netieša, pamatojoties uz fluorofora konjugāciju ar izmantotajām antivielām. Tiešā imunofluorescencē fluorofors konjugējas ar primāro antivielu, kas ir vienīgā antiviela, kas tiek izmantota šajā tehnikā. Pretstatā tam netiešajā imunofluorescencē fluorofors konjugējas ar sekundāro antivielu, kas ir viens no diviem antivielu veidiem, kas ir iesaistīti šajā tehnikā. Tādējādi galvenā atšķirība starp tiešo un netiešo imunofluorescenci ir antivielu tips, kas konjugējas ar fluoroforu.
Šajā infografikā ir sniegts līdzās salīdzinājums par atšķirību starp tiešo un netiešo imunofluorescenci.
Kopsavilkums - tiešā pret netiešo imunofluorescenci
Imunofluorescence ir metode, ko izmanto, lai noteiktu specifisku antigēnu klātbūtni paraugā. Šī metode izmanto specifiskas antivielas. Tāpēc šajā gadījumā antivielas konjugējas ar fluoroforiem, lai tās noteiktu, izmantojot fluorescējošu mikroskopu. Turklāt ir divu veidu imunofluorescence, proti, tiešā un netiešā imunofluorescence. Tiešā imunofluorescence ietver vienu antivielu un fluoroforu, kas tieši konjugēts ar šo antivielu. Netiešā imunofluorescence ietver divas antivielas; primāro un sekundāro un fluoroforu, kas konjugēts ar sekundāro antivielu. Tā kā vairākas sekundārās antivielas var saistīties ar primāro antivielu un vairāki fluorofori var konjugēt ar sekundārajām antivielām, netiešā imunofluorescence ir jutīgāka metode nekā tiešā metode. Turklāt netiešā metode ir lētāka nekā tiešā metode. Tādējādi šī ir atšķirība starp tiešo un netiešo imunofluorescenci.
