Galvenā atšķirība - tiešā un netiešā ELISA
Enzīmu imūntests (ELISA), kas pazīstams arī kā enzīmu imūntests, ir seroloģisks tests, kas nosaka antivielas asinīs. To izmanto kā diagnostikas līdzekli, lai noskaidrotu, vai pacients ir bijis pakļauts noteikta veida vīrusam vai citam infekcijas izraisītājam (antigēnam) un vai organismā nav radušās antivielas pret infekciju. ELISA var arī identificēt pagātnes un pašreizējās infekcijas. Tāpēc ārsti ELISA bieži izmanto kā iepriekšēju skrīninga testu pirms padziļinātas slimību analīzes. Šo testu var veikt laboratorijā, paņemot no pacienta asins paraugu. Ir divu veidu ELISA tests: tiešā ELISA un netiešā ELISA. Galvenā atšķirība starp tiešo un netiešo ELISA ir tā, ka netiešā ELISA ir jutīgāka un tai ir jāpievieno sekundāra antiviela, savukārt tiešā ELISA ir mazāk jutīga un izmanto tikai primāro antivielu.
Kas ir Direct ELISA?
ELISA ir slimību diagnostikas tests, ko veic, lai noteiktu noteiktu antigēnu vai antivielu klātbūtni asinīs. To veic kā plates testu. Tas izmanto antivielas, kas saistītas ar viegli pārbaudāmiem enzīmiem. Antigēnu klātbūtne seruma paraugā saistās ar specifiskām antivielām, kas saistītas ar fermentiem. Pēdējā posmā tiek pievienots īpašs substrāts, kas reaģē ar fermentu. Ferments pārvērš substrātu krāsainā vai signālu veidojošā produktā. Krāsas maiņa ķīmiskajā substrātā atklāj noteiktas antivielas klātbūtni seruma paraugā. Tiešajā ELISA testā tiek izmantota tikai primārā antiviela, kas saistīta ar fermentu. Saistoties ar antigēnu, tas ātri maina krāsu, norādot uz infekcijas izraisītāja klātbūtni asinīs. Tomēr signālu intensitāte tiešā ELISA gadījumā ir vājāka, jo epitopi aprobežojas ar antigēnu saistīšanos. Tādējādi tiešā ELISA ir mazāk jutīga salīdzinājumā ar netiešo ELISA.
Attēls 01: Tiešais ELISA tests
Kas ir netiešā ELISA?
ELISA var veikt, izmantojot divu veidu antivielas, proti; primārā antiviela un sekundārā antiviela. Netiešais ELISA rīks izmanto abu veidu antivielas, lai pastiprinātu signālus labākai noteikšanai. Netiešo ELISA metodi veic šādi.
- Plāksnes inkubē ar antigēniem un mazgā, lai bloķētu nespecifisku saistīšanos.
- Pēc tam pievieno primārās antivielas un nomazgā.
- Ar fermentiem saistītās sekundārās antivielas tiek pievienotas un mazgātas.
- Pievieno substrātu un ļauj tam reaģēt ar fermentiem.
- Tiek atklāti signāli un tiek identificēta konkrētā antigēna esamība vai neesamība paraugā.
Netiešajā ELISA testā vairākas sekundāras antivielas var saistīties ar vienu primāro antivielu. Sekundārās antivielas ir saistītas ar viegli pārbaudāmiem enzīmiem. Tāpēc viena saistīšana var radīt spēcīgu signālu vairāk nekā vienas mijiedarbības dēļ. Tādējādi netiešā ELISA ir jutīgāka nekā tiešā ELISA. Tomēr netiešā ELISA var radīt nespecifiskus signālus sekundāro antivielu savstarpējās reakcijas dēļ.
2. attēls: netiešais ELISA tests
Kāda ir atšķirība starp tiešo un netiešo ELISA?
Tiešā pret netiešo ELISA |
|
| Tiešā ELISA ir mazāk jutīga salīdzinājumā ar netiešo ELISA. | Netiešā ELISA metode ir jutīgāka. |
| Atvēlētais laiks | |
| Tiešais ELISA tests ir ātrs process. | Netiešā ELISA pārbaude ir laikietilpīga. |
| Antivielu lietošana | |
| Tiešajā ELISA testā izmanto tikai viena veida antivielas (primārās antivielas). | Netiešajam ELISA testam tiek izmantotas primārās un sekundārās antivielas. |
| Saikne ar enzīmiem | |
| Primārās antivielas ir saistītas ar fermentiem. | Sekundārās antivielas ir saistītas ar fermentiem. |
| Otro antivielu krusteniskā reaktivitāte | |
| Tiešā ELISA metode novērš otro antivielu krustenisko reaktivitāti. | Netiešo ELISA ietekmē otro antivielu krusteniskā reaktivitāte. |
| Signāli | |
| Signāli ir vāji, salīdzinot ar netiešo ELISA. | Signāli tiek pastiprināti netiešajā ELISA testā. Tādējādi to ir viegli noteikt. |
Kopsavilkums - tiešais vs netiešais ELISA
ELISA ir bioķīmiska metode, ko galvenokārt izmanto imunoloģijā, lai noteiktu antivielas vai antigēna klātbūtni pacienta asins paraugā. To var veikt, izmantojot divus procesus, kas pazīstami kā tieša vai netieša ELISA. Tiešais ELISA tests izmanto tikai primārās antivielas, lai noteiktu antigēnu, savukārt netiešais ELISA izmanto gan primārās, gan sekundārās antivielas. Tiešajā ELISA testā primārās antivielas tiek marķētas, savukārt netiešajā ELISA testā tiek marķētas sekundārās antivielas. Šī ir atšķirība starp tiešo un netiešo ELISA.
