Galvenā atšķirība starp gēla filtrāciju un afinitātes hromatogrāfiju ir tāda, ka gēla filtrācijas hromatogrāfija ir atkarīga no analizējamā parauga molekulmasas vai lieluma atšķirībām, savukārt afinitātes hromatogrāfija ir atkarīga no analizējamās vielas afinitātes pret imobilizētu ligandu.
Termins hromatogrāfija analītiskajā ķīmijā attiecas uz komponentu atdalīšanas procesu maisījumā, izmantojot dažādas metodes. Hromatogrāfija ir kolektīvs nosaukums, kas apzīmē dažādas atdalīšanas metodes.
Kas ir gēla filtrēšanas hromatogrāfija?
Gēla filtrēšanas hromatogrāfija ir analītisks paņēmiens, kurā komponentu atdalīšana ir atkarīga no molekulmasas vai izmēra atšķirības. Šo metodi sauc arī par izmēru izslēgšanas hromatogrāfiju vai molekulāro sietu hromatogrāfiju. Atdalīšanas tehnika šajā procesā ir atkarīga no paraugā esošo molekulu atšķirīgās spējas iekļūt gēla filtrēšanas vides porās.
Gēla filtrēšanas tehnikā stacionārā fāze satur hidratēta, sūklim līdzīga materiāla lodītes ar molekulāro izmēru porām ar šauru izmēru diapazonu. Ja mēs izlaižam ūdens šķīdumu, kas sastāv no dažāda lieluma molekulām, caur kolonnu, kurā ir šie “molekulārie sieti”, molekulas, kas ir lielākas par filtrēšanas vides porām, ātri pārvietojas caur kolonnu. Turpretim mazākās molekulas iekļūst gela porās un mēdz lēnām pārvietoties pa kolonnu. Molekulas eluē no kolonnas molekulu izmēra samazināšanās secībā. Šeit gēla izslēgšanas robeža ir mazāko molekulu molekulmasa, kuras nespēj iekļūt noteiktā gēla porās.
Ir dažādi gēla filtrēšanas paņēmienu veidi, piemēram, netiešā gēla filtrēšanas metode, līdzsvara gēla filtrēšana, gēla lodīšu dialīze utt. Netiešā gēla filtrācijas hromatogrāfija ir noderīga brīvo vairogdziedzera hormonu noteikšanā. Līdzsvara stāvokļa gēla filtrācijas hromatogrāfija ir netieša metode, kas galvenokārt ir noderīga brīvo steroīdu, piemēram, kortizola, testosterona utt., mērīšanai. Gēla lodīšu dialīze, no otras puses, ir līdzsvara stāvokļa gēla filtrācijas modifikācija, kas ir salīdzinoši vienkāršāka.
Kas ir afinitātes hromatogrāfija?
Afinitātes hromatogrāfija ir analītiska metode un atdalīšanas metode, kas ir atkarīga no specifiskas saistīšanās mijiedarbības starp imobilizētu ligandu un tā saistīšanas partneri. Daži piemēri ietver saistīšanos ar antivielu un antigēnu, saistīšanos ar enzīmu substrātu un saistīšanos ar enzīmu inhibitoriem. Tāpēc šai tehnikai ir daudz svarīgu pielietojumu nukleīnskābju attīrīšanā, olb altumvielu attīrīšanā no šūnu ekstraktiem un attīrīšanā no asinīm.
Šajā tehnikā vissvarīgākā īpašība ir ligandu imobilizācija. Šim nolūkam varam izmantot dažādus materiālus, piemēram, akrilātus un silikagelu. Ir svarīgi novērst mērķa molekulas steriskus traucējumus ligandam. Turklāt cietajai fāzei ir pievienots inhibitors. Mēs šo inhibitoru saucam par starpliku. Klasiski starplikas sastāv no ogļūdeņraža ķēdes.
Afinitātes hromatogrāfijas stacionārā fāze satur kodolu, starpliku un ligandu. Dažreiz tam ir arī metāla jons, kas ir savienots ar ligandu. Šajā tehnikā vispiemērotākā cietā fāze stacionārajai fāzei ir agarozes gēls, jo to ir viegli izdalīt, lai piepildītu un iepakotu kolonnu ar jebkura izmēra sveķu slāņiem, un tā ir pietiekami liela, lai biomolekulas varētu brīvi ieplūst lodītes un caur tām. Ligandi var kovalenti pievienoties lodīšu polimēram dažādos veidos. Visizplatītākie starplikas savienojumi ir ciānbromīds, epoksīds, epoksīds ar C6 skābi un diamīns. No otras puses, ligands, ko varam izmantot, atšķiras atkarībā no mērķa, piemēram, antivielas-antigēns, dzelzs vai alumīnija joni-fosfoproteīni, avidīns-biotīns, glutations-GST, helātu veidotāji-His-tagged proteīni utt.
Kāda ir atšķirība starp gēla filtrēšanu un afinitātes hromatogrāfiju?
Hromatogrāfija ir svarīgs analītisks paņēmiens. Gēla filtrācijas hromatogrāfija un afinitātes hromatogrāfija ir divas svarīgas hromatogrāfijas variācijas. Galvenā atšķirība starp gēla filtrāciju un afinitātes hromatogrāfiju ir tāda, ka gēla filtrācijas hromatogrāfija ir atkarīga no analizējamā parauga molekulmasas vai lieluma atšķirībām, savukārt afinitātes hromatogrāfija ir atkarīga no analizējamās vielas afinitātes pret imobilizētu ligandu.
Kopsavilkums - gēla filtrēšana pret afinitātes hromatogrāfiju
Ir dažādi hromatogrāfijas metožu veidi atkarībā no to pielietojuma un analizējamā parauga rakstura. Gēla filtrēšana un afinitātes hromatogrāfija ir divi šādi paņēmienu veidi. Galvenā atšķirība starp gēla filtrāciju un afinitātes hromatogrāfiju ir tāda, ka gēla filtrēšanas hromatogrāfija ir atkarīga no analizējamā parauga molekulmasas vai lieluma atšķirībām, savukārt afinitātes hromatogrāfija ir atkarīga no analizējamās vielas afinitātes pret imobilizētu ligandu.
