Galvenā atšķirība starp imunoprecipitāciju un koimunoprecipitāciju ir tāda, ka imūnprecipitācija ir metode, kas izgulsnē proteīnu no šķīduma, izmantojot specifisku antivielu, savukārt koimunoprecipitācija ir metode, kas no šķīduma izgulsnē neskartus proteīnu kompleksus, izmantojot specifisku antivielu.
Antigēna-antivielu mijiedarbība ir specifiska ķīmiska mijiedarbība starp antivielām, ko ražo B šūnas, un antigēniem (olb altumvielām) imūnreakcijas laikā. Parasti šķīstošie antigēni savienojas ar šķīstošām antivielām elektrolīta klātbūtnē šķīstošā temperatūrā un pH, lai izveidotu nešķīstošu redzamu kompleksu. To sauc par nokrišņu reakciju. Tāpēc imunoprecipitācija un koimunoprecipitācija ir divu veidu izgulsnēšanās reakcijas, kuras parasti izmanto laboratorijās, lai identificētu proteīnus, piemēram, antigēnus.
Kas ir imunoprecipitācija?
Imunoprecipitācija ir metode proteīna izgulsnēšanai no šķīduma, izmantojot specifisku antivielu. Dažreiz šo paņēmienu sauc arī par individuālu olb altumvielu imunoprecipitāciju. Imunoprecipitācija izmanto antivielu, lai izolētu izvēlēto interesējošo proteīnu no šūnu lizāta. Antiviela attīra savu specifisko mērķa proteīnu vai antigēnu no maisījuma. Antiviela saistās ar proteīnu, un antivielas-antigēna komplekss tiek izvilkts no parauga. Eksperimentālajā iestatījumā antigēna-antivielu komplekss tiek izvilkts, izmantojot ar A/G saistītu agarozi vai magnētiskās lodītes. Vēlāk lodītes tiek mazgātas un interesējošais proteīns tiek eluēts. Imunoprecipitācijas ceļā iegūto attīrīto proteīnu vai antigēnu pārbauda ar dažādām metodēm, piemēram, ar enzīmu saistītu imūnsorbcijas testu (ELISA) un Western blot (WB).
01. attēls: imunoprecipitācija
Turklāt izolētus proteīnus vai antigēnus var kvantitatīvi noteikt un identificēt, izmantojot masas spektrometriju, izmantojot enzīmu sagremošanas modeļus, kuru pamatā ir primārā secība. Pirms imunoprecipitācijas eksperimenta uzsākšanas ir jāņem vērā daži apsvērumi: metodes formāta izvēle, proteīnu un lodīšu saistīšana, pareizās primārās antivielas un izotipa izvēle un negatīvā kontrole.
Kas ir koimunoprecipitācija?
Koimūnnogulsnēšana ir neskartu olb altumvielu kompleksu izgulsnēšanas paņēmiens no šķīduma, izmantojot specifisku antivielu. Koimunoprecipitācija parasti darbojas, atlasot specifisku antivielu, kas ir vērsta pret zināmu proteīnu (antigēnu), kas, domājams, ir lielāka proteīnu kompleksa loceklis. Mērķējot zināmo locekli ar specifisku antivielu, ir iespējams izvilkt visu olb altumvielu kompleksu no šķīduma. Tas ļauj identificēt nezināmos kompleksa dalībniekus. Proteīna kompleksu izvilkšanas jēdziens no šķīduma dažreiz tiek saukts par “novilkšanas” mehānismu.
Attēls 02: B Kopimunoprecipitācija
Koimunoprecipitācija ir spēcīgs paņēmiens, ko izmanto, lai analizētu proteīnu un olb altumvielu mijiedarbību. Galvenais koimunoprecipitācijas mērķis ir mijiedarbojošo partneru, piemēram, ligandu, kofaktoru vai signalizācijas molekulu identificēšana interesējošajam proteīnam. Turklāt koimunoprecipitācija ir efektīva metode, ko izmanto proteīnu atdalīšanai no seruma, šūnu lizāta, homogenizētiem audiem vai kondicionētas barotnes.
Kādas ir imunoprecipitācijas un koimunoprecipitācijas līdzības?
- Imunoprecipitācija un koimunoprecipitācija ir divu veidu metodes, kuru pamatā ir nogulsnēšanās reakcijas.
- Abas metodes var izmantot, lai identificētu mērķa antigēnu, izmantojot specifisku antivielu.
- Abas metodes ir ļoti atkarīgas no antigēna un antivielu mijiedarbības.
- Tos regulāri izmanto klīniskajās laboratorijās.
Kāda ir atšķirība starp imunoprecipitāciju un koimunoprecipitāciju?
Imunoprecipitācija ir metode, kas izgulsnē proteīnu no šķīduma, izmantojot specifisku antivielu, savukārt koimunoprecipitācija ir metode, kas no šķīduma izgulsnē neskartus proteīnu kompleksus, izmantojot specifisku antivielu. Tādējādi šī ir galvenā atšķirība starp imunoprecipitāciju un koimunoprecipitāciju. Turklāt imunoprecipitāciju biežāk izmanto laboratorijās, savukārt koimunoprecipitāciju parasti neizmanto laboratorijās.
Tālāk esošajā infografikā ir parādītas atšķirības starp imunoprecipitāciju un koimunoprecipitāciju tabulas veidā, lai salīdzinātu līdzās.
Kopsavilkums - imunoprecipitācija pret koimunoprecipitāciju
Imunoprecipitācija un koimunoprecipitācija ir divu veidu nogulsnēšanas reakcijas balstītas metodes, kas ir atkarīgas no antigēna un antivielu mijiedarbības. Imunoprecipitācijas tehnika izgulsnē proteīnu no šķīduma, izmantojot specifisku antivielu, savukārt koimunoprecipitācijas tehnika no šķīduma izgulsnē neskartus proteīnu kompleksus, izmantojot specifisku antivielu. Tātad, šeit ir apkopota atšķirība starp imunoprecipitāciju un koimunoprecipitāciju.
