Galvenā atšķirība FPLC un HPLC ir tāda, ka FPLC ir šķidruma hromatogrāfijas veids, kas attīra lielas biomolekulas, piemēram, proteīnus, nukleotīdus un peptīdus, savukārt HPLC ir šķidruma hromatogrāfijas veids, kas atdala mazas molekulmasas savienojumus.
Šķidruma hromatogrāfija ir metode, ko izmanto, lai paraugu sadalītu atsevišķos komponentos. Šī atdalīšana notiek konkrētu paraugu mijiedarbības dēļ ar mobilajām un stacionārajām fāzēm. Komponenti paraugā tiek atdalīti, pamatojoties uz katra komponenta afinitāti pret kustīgo fāzi šķidruma hromatogrāfijā. Kad kustīgā fāze un paraugs iziet cauri kolonnai, parauga sastāvdaļas sāk atdalīties joslās, kuras var noteikt ar UV-VIS spektroskopiju. Tāpēc FPLC un HPLC ir divu veidu šķidruma hromatogrāfijas metodes.
Kas ir FPLC?
FPLC ir šķidruma hromatogrāfijas veids, kas attīra lielas biomolekulas, piemēram, proteīnus, nukleotīdus un peptīdus. Ātro olb altumvielu šķidruma hromatogrāfiju (FPLC) pirmo reizi izstrādāja un tirgoja Zviedrijā uzņēmums Pharmacia 1982. gadā. To bieži izmanto, lai analizētu vai attīrītu olb altumvielu maisījumus. Tas notiek, pamatojoties uz principu par parauga komponentu afinitāti pret kustīgu šķidrumu (kustīgā fāze) un porainu cietu materiālu (stacionārā fāze). FPLC mobilā fāze ir buferis, bet stacionārā fāze ir sveķi, kas sastāv no lodītēm. Tas parasti sastāv no šķērssaistītas agarozes, kas iepakota cilindriskā stikla vai plastmasas kolonnā.
Attēls 01: FLPC (ātrās olb altumvielu šķidruma hromatogrāfijas) aparāts
Lielākajā daļā FLPC stratēģijas tiek izmantoti jonu apmaiņas sveķi. Tāpēc interesējošais proteīns saistās ar sveķiem ar lādiņa mijiedarbību. FLPC tehnikā tiek izmantoti arī divi buferi: buferis 1 (darba buferis) un buferis 2 (eluēšanas buferis). Sākotnēji, palaižot buferšķīdumu un parauga maisījumu cauri kolonnai, maisījumā esošais interesējošais proteīns saistās ar sveķiem, mijiedarbojoties ar lādiņu. Bet interesējošais proteīns tiek atdalīts un atgriežas šķīdumā eluēšanas buferšķīdumā, kad eluēšanas buferis procesa beigās plūst cauri kolonnai. Vēlāk šķīdums (eluants, kas satur interesējošo proteīnu) iziet cauri diviem detektoriem, kas mēra sāls koncentrāciju un olb altumvielu koncentrāciju. Kad katrs proteīns tiek eluēts, noteikšanas laikā tas parādās kā “pīķis”, un to var savākt turpmākai lietošanai.
Kas ir HPLC?
HPLC ir šķidruma hromatogrāfijas veids, kas atdala mazas molekulmasas savienojumus. 1969. gadā pirmo HPLC komerciāli ražoja Waters Corporation, ASV. Augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfijā (HPLC) parauga maisījumu (analītu) šķīdinātājā (kustīgā fāzē) augstā spiedienā sūknē caur kolonnu ar hromatogrāfisko iepakojuma materiālu (stacionāro fāzi). Parauga maisījumu pārvadā kustīga hēlija vai slāpekļa nesējgāzes plūsma.
Attēls 02: HPLC (augstas veiktspējas šķidruma hromatogrāfija)
Parauga maisījuma komponenti, kuriem ir vismazākā mijiedarbība ar stacionāro fāzi vai vislielākā mijiedarbība ar kustīgo fāzi, ātrāk iziet no kolonnas. No otras puses, parauga maisījuma komponenti, kuriem ir vislielākā mijiedarbība ar stacionāro fāzi vai vismazākā mijiedarbība ar mobilo fāzi, no kolonnas iziet lēnāk. Pamatojoties uz iepriekš minēto mijiedarbības principu, parauga maisījuma sastāvdaļas var atdalīt. Turklāt instrumenta detektors identificē katru parauga maisījuma sastāvdaļu, kas iziet no kolonnas. HPLC izmanto, lai pārbaudītu vides un bioloģiskos paraugus, lai noteiktu zināmu savienojumu, piemēram, zāļu, toksīnu vai pesticīdu, esamību vai neesamību. To izmanto dažādās nozarēs, piemēram, farmācijā, vides zinātnē, kriminālistikā un ķimikālijās.
Kādas ir līdzības starp FPLC un HPLC?
- FPLC un HPLC ir šķidrumu hromatogrāfijas veidi.
- Abus izmanto bioloģisko paraugu atdalīšanai un identificēšanai.
- Tiem ir šķidrā kustīgā fāze un cietā stacionārā fāze.
- Abas metodes izmanto kolonnu, lai izietu cauri paraugam.
- Šīs metodes izmanto sūkņus, detektorus, vārstus un programmatūru paraugu atdalīšanai un noteikšanai.
Kāda ir atšķirība starp FPLC un HPLC?
FPLC ir šķidruma hromatogrāfijas veids, ko izmanto lielu biomolekulu, piemēram, proteīnu, nukleotīdu un peptīdu, attīrīšanai. HPLC ir šķidruma hromatogrāfijas veids, ko izmanto mazas molekulmasas savienojumu atdalīšanai. Tātad, šī ir galvenā atšķirība starp FPLC un HPLC. Turklāt FPLC izmanto pH un vadītspējas monitorus, kā arī akas kā frakciju savācējus. Turpretim HPLC neizmanto pH un vadītspējas monitorus un frakciju savācējus.
Tālāk esošajā infografikā tabulas veidā ir norādītas citas atšķirības starp FPLC un HPLC.
Kopsavilkums - FPLC pret HPLC
Hromatogrāfija ir laboratorijas analītiska metode, ko izmanto komponentu atdalīšanai no maisījuma. Tas ir sadalīts vairākos veidos, piemēram, kolonnu hromatogrāfija, gāzu hromatogrāfija, šķidrumu hromatogrāfija, jonu apmaiņas hromatogrāfija utt. FPLC un HPLC ir divu veidu šķidruma hromatogrāfijas metodes. FPLC ir šķidruma hromatogrāfijas veids, ko izmanto lielu biomolekulu, piemēram, olb altumvielu, nukleotīdu un peptīdu, attīrīšanai. No otras puses, HPLC ir šķidruma hromatogrāfijas veids, ko izmanto mazas molekulmasas savienojumu atdalīšanai. Tādējādi šis ir kopsavilkums par to, kāda ir atšķirība starp FPLC un HPLC.
