Galvenā atšķirība starp RP HPLC un HIC ir tāda, ka RP HPLC izmanto polārāku kustīgo fāzi un mazāk polāru stacionāro fāzi. Savukārt HIC izmanto hidrofobu stacionāru fāzi, kas ļauj tai pievienoties hidrofobām molekulām.
Hromatogrāfija ir analītiska metode, kas palīdz sadalīt maisījumu tā sastāvdaļās. Pirmkārt, mums ir jāizšķīdina paraugs, kas jāatdala šķīdumā. Šo šķīduma-vielu maisījumu sauc par kustīgo fāzi. Tad mobilā fāze tiek izlaista caur citu materiālu, ko sauc par stacionāro fāzi. Stacionārā fāze nosaka komponentu atdalīšanu. Atdalīšana notiek materiāla sadalīšanas dēļ starp mobilo fāzi un stacionāro fāzi.
Kas ir RP HPLC?
Termins RP HPLC apzīmē reversās fāzes augstas veiktspējas šķidruma hromatogrāfiju. Tas ietver maisījuma komponentu atdalīšanu atbilstoši hidrofobitātei. Hidrofobās sastāvdaļas mobilajā fāzē savienojas ar imobilizētajiem hidrofobajiem ligandiem stacionārajā fāzē, savukārt hidrofilie komponenti eluē cauri stacionārajai fāzei, nepieķeroties stacionārās fāzes virsmai.
Attēls 01: HPLC aparāts
Turklāt šai metodei ir lielāka reproducējamība salīdzinājumā ar citām hromatogrāfijas metodēm, un tā arī parāda plašu pielietojamību. Tāpēc mēs izmantojam šo metodi laboratorijās vairāk nekā 75% no visām HPLC metodēm. Lielāko daļu laika kā kustīgo fāzi mēs izmantojam ūdens ūdens maisījumu ar sajaucamu polāro organisko šķīdinātāju. Tādējādi tas nodrošinās šķīdumā esošo hidrofobo komponentu piesaisti stacionārās fāzes virsmai.
Kas ir HIC?
Termins HIC apzīmē hidrofobās mijiedarbības hromatogrāfiju. Tas ir apgrieztās fāzes HPLC veids, un šo metodi galvenokārt izmanto lielu biomolekulu, piemēram, olb altumvielu, atdalīšanai. Šajā metodē mums ir jāizmanto ūdens vide, lai izveidotu biomolekulas paraugu. Tas ir tāpēc, ka organiskie šķīdinātāji var izraisīt olb altumvielu denaturāciju. Turklāt šī metode izmanto mijiedarbību starp lielām molekulām ar nedaudz hidrofobu stacionārās fāzes virsmu. Turklāt mums paraugā jāizmanto augsta sāls koncentrācija, jo tas veicina olb altumvielu saglabāšanos uz iepakojuma; šo procesu sauc par izsālīšanu. Pakāpeniski samazinot sāls koncentrāciju, mēs varam likt biomolekulām eluēt atsevišķi atbilstoši to hidrofobitātei.
Parasti šī metode izmanto apstākļus, kas ir pretēji jonu apmaiņas hromatogrāfijā. Šajā tehnikā, pirmkārt, caur kolonnu ir jāizlaiž buferšķīdums, lai samazinātu izšķīdušās vielas šķīdināšanu paraugā. Tas padara proteīna hidrofobos reģionus pakļautus. Tomēr, ja molekula ir hidrofobāka, saistīšanās veicināšanai ir nepieciešams mazāk sāls. Šeit vispirms tiek eluētas mazāk hidrofobās izšķīdušās vielas, un saskaņā ar sāls koncentrācijas izmaiņām vairāk hidrofobās izšķīdušās vielas tiek eluētas pēdējās.
Kāda ir atšķirība starp RP HPLC un HIC?
Hromatogrāfija ir analītisks paņēmiens komponentu atdalīšanai maisījumā. RP HPLC un HIC ir divas specializētas hromatogrāfijas metodes. Galvenā atšķirība starp RP HPLC un HIC ir tāda, ka RP HPLC izmanto polārāku kustīgo fāzi un mazāk polāru stacionāro fāzi, turpretim HIC izmanto hidrofobu stacionāro fāzi, kas ļauj tai pievienoties hidrofobām molekulām.
Tālāk esošajā infografikā ir apkopota atšķirība starp RP HPLC un HIC.
Kopsavilkums - RP HPLC pret HIC
Hromatogrāfija ir analītisks paņēmiens komponentu atdalīšanai maisījumā. RP HPLC un HIC ir divas specializētas hromatogrāfijas metodes. Galvenā atšķirība starp RP HPLC un HIC ir tāda, ka RP HPLC izmanto polārāku kustīgo fāzi un mazāk polāru stacionāro fāzi, turpretim HIC izmanto hidrofobu stacionāro fāzi, kas ļauj tai pievienoties hidrofobām molekulām.
