Galvenā atšķirība starp GFP un EGFP ir tāda, ka GFP ir savvaļas tipa proteīns, kas iekļauts nezīdītāju šūnu molekulārajā klonēšanā, savukārt EGFP ir uzlabots vai izstrādāts GFP veids, ko var izmantot zīdītāju šūnām..
Molekulārā klonēšana ir progresīva tehnika, ko zinātnieki ārkārtīgi izmanto proteīnu ekspresijai, izmantojot rekombinanto tehnoloģiju. Rekombinantās DNS tehnoloģijā ir nepieciešams veiksmīgi pārveidot rekombinanto vektoru saimniekorganismā. Tādējādi transformācijas procesa laikā ir jāidentificē un jāapstiprina, vai interesējošais gēns ir vai nav transformēts uz saimniekorganismu. Lai to novērtētu, molekulārie biologi izmanto vairākas metodes. No šīm metodēm viens ir reportiera gēns. Šie reportieru gēni darbojas kā atlasāmi marķieri, lai atlasītu pareizos transformantus. Tādējādi zaļais fluorescējošais proteīns (GFP) un uzlabotais zaļais fluorescējošais proteīns (EGFP) ir divi reportierproteīni, ko izmanto molekulārajā klonāšanā.
Kas ir GFP?
GFP ir savvaļas tipa proteīns, kas satur 238 aminoskābju atlikumus un vairākus atlasāmus aminoskābju secību apgabalus, kas to atšķir no citiem fluorescējošiem proteīniem. Turklāt šis savvaļas tipa proteīns sākotnēji bija izolēts no Aequorea Victoria; medūzu veids. Tomēr dabas parādībās, reaģējot uz noteiktiem stimuliem, medūza spēja radīt zaļas krāsas fluorescenci.
Agrāk šī koncepcija pārsteidza zinātniekus, un viņi nolēma to izmantot savās rekombinantās DNS tehnoloģijās. Līdz ar to zinātnieki izmantoja šo savvaļas tipa gēna mutantu formu kā reportiera gēnu savos gēnu ekspresijas pētījumos. GFP savvaļas tipa gēns spēj ražot proteīnu, kas nodrošina fluorescenci istabas temperatūrā vai UV gaismā. Tāpēc, ievietojot transformantos, tas izsaka un rada fluorescenci. Ja fluorescence rodas pēc transformācijas procesa, tas apstiprina transformācijas procesa panākumus. Vienkāršiem vārdiem sakot, fluorescences emisija norāda uz veiksmīgu vektora transformāciju, kas pārnēsā interesējošo gēnu, par saimniekorganismu.
01. attēls: GFP
Šā iemesla dēļ GFP darbojas kā gēnu ekspresijas marķieris in vivo. Pašlaik GFP ražošanai tiek izmantotas gēnu inženierijas metodes. Ir pieejamas arī daudzas uzlabotas GFP versijas, piemēram, EGFP. Tādējādi tas ļauj efektīvi izmantot GFP molekulārās klonēšanas un gēnu ekspresijas pētījumos.
Kas ir EGFP?
Enhanced Green Fluorescent Protein jeb EGFP ir uzlabota GFP versija. Vienkāršiem vārdiem sakot, mēs varam definēt EGFP kā savvaļas tipa GFP inženierijas versiju. Kad GFP savvaļas tipa gēns mutē, tas rada labvēlīgu ietekmi. Tādējādi GFP mutētais gēns ļauj izteikt jaunas rakstzīmes, un tā rezultātā mēs varam radīt uzlabotu GFP ar uzlabotām īpašībām. Turklāt mēs varam veiksmīgi ieviest mutācijas savvaļas tipa GFP gēnā, izmantojot apstarošanu vai ķīmiskas metodes. Šie mutētie gēni pēc tam ražo EGFP, kam ir labvēlīgākas īpašības.
2. attēls: EGFP
Uzlabotie EGFP raksturlielumi ir šādi;
- Var izstarot spēcīgākus fluorescences signālus.
- Ir augsta jutība.
- Var izmantot zīdītāju šūnām, nevis prokariotiem un citiem zemāka līmeņa eikariotiem.
- Nodrošina arī paaugstinātu produkta tīrību.
Tādēļ, salīdzinot ar GFP, EGFP ir vēlamā izvēle gēnu ekspresijas pētījumiem. Tomēr produkts ir dārgāks salīdzinājumā ar GFP.
Kādas ir līdzības starp GFP un EGFP?
- GFP un EGFP ir divi proteīni, kas spēj izdalīt zaļu krāsu
- Tāpēc gēnu ekspresijas pētījumos abi darbojas kā reportierproteīni.
- Tāpat ir iespējams sintezēt abus, izmantojot rekombinantās DNS tehnoloģiju.
- Turklāt ir viegli vēl vairāk mainīt šos divus veidus, lai sintezētu uzlabotas formas.
Kāda ir atšķirība starp GFP un EGFP?
Reportera gēns ir gēns, kas saistās ar interesējošo gēnu rekombinantās DNS tehnoloģijā. Tas signalizē par veiksmīgu rekombinantā vektora transformāciju saimniekam. Šeit GFP un EGFP ir divu veidu zaļie fluorescējošie proteīni, kas darbojas kā reportiera proteīni. Tomēr galvenā atšķirība starp GFP un EGFP ir tā, ka GFP ir savvaļas veids, savukārt EGFP ir GFP inženierijas versija. Turklāt EGFP ir labvēlīgākas īpašības nekā GFP. Piemēram, EGFP rada spēcīgāku dienasgaismas gaismu un ir jutīgāka nekā GFP. Vēl viena atšķirība starp GFP un EGFP ir sistēmas, kurās mēs varam tās izmantot. Ne-zīdītāju sistēmas izmanto GFP, savukārt zīdītāju sistēmas izmanto EGFP.
Tālāk esošajā infografikā tabulas veidā parādīta atšķirība starp GFP un EGFP.
Kopsavilkums - GFP pret EGFP
GFP un EGFP ir reportierproteīni molekulārās klonēšanas un gēnu ekspresijas pētījumos. GFP ir savvaļas tipa proteīns, kas ir zaļi fluorescējošs proteīns. Sākotnēji proteīns bija izolēts no medūzas Aequorea victoria. Turpretim EFGP ir uzlabota GFP proteīna forma. Tas ir savvaļas tipa mutants ar uzlabotām īpašībām. Tādējādi EFGP ir augstāks signāla stiprums un augstāka jutība. Tāpēc mēs varam to izmantot zīdītāju vektoriem. Turpretim GFP galvenokārt izmanto tikai vektoriem, kas nav zīdītāji. Kopumā šī ir atšķirība starp GFP un EGFP.
