Galvenā atšķirība - DNS un RNS ekstrakcija
DNS un RNS izpēte ir būtiski aspekti, lai izprastu molekulārās bioloģijas, biotehnoloģijas un ģenētikas pamatjēdzienus. Tīra DNS un RNS paraugu ekstrakcija ir nepieciešama, lai šo pētījumu laikā veiktu eksperimentālās procedūras. Galvenā atšķirība starp DNS un RNS ekstrakciju ir tāda, ka DNS ekstrakcijas process attīra DNS, bet RNS ekstrakcija attīra RNS. DNS ekstrakcijas procesam ir trīs dažādi posmi: šūnu līze un membrānas lipīdu un proteīnu katabolisms, katabolītu salipšana ar koncentrētu sāls šķīdumu un DNS izgulsnēšana ar etanolu. Trīspakāpju procedūra var sastāvēt no divām izvēles darbībām. RNS attīrīšanas process sastāv no četriem dažādiem posmiem: guanidija tiocianāta pievienošana šūnu līzei, proteīnu denaturēšana, ieskaitot ribonukleāzes, RNS atdalīšana, pievienojot hloroformu un fenolu, un nogulšņu mazgāšana, izmantojot etanolu.
Kas ir DNS ekstrakcija?
DNS ekstrakcija ir fizikāls un ķīmisks process, ko izmanto DNS attīrīšanai no parauga. DNS ekstrakcija ir svarīgs aspekts molekulārās bioloģijas un tiesu medicīnas zinātņu kontekstā. Process sastāv no trim pamata soļiem. Sākotnēji jāiegūst interesējošās šūnas. Tālāk tiek veicināta šūnu līze, lai salauztu šūnu membrānu, kas atver šūnu un pakļauj citoplazmu kopā ar DNS. Virsmaktīvās vielas vai citus mazgāšanas līdzekļus var izmantot, lai izdalītu lipīdus no šūnu membrānas, kamēr proteāzes katabolizē esošos proteīnus. Šis ir neobligāts solis. Kad šūna ir lizēta, katabolizēto molekulu salipšanu veicina koncentrēti sāls šķīdumi. Tam seko šķīduma centrifugēšana, kas atdala gruvešus no DNS. Šajā posmā diferencētā DNS tiek sajaukta ar šūnu cikla laikā izmantotajiem reaģentiem un sāļiem.
Attēls 01: DNS ekstrakcija
Lai to tālāk attīrītu, var izmantot šādas darbības. Viena no metodēm ir izgulsnēšana ar etanolu, kas ietver ledus auksta etanola sajaukšanu ar atdalīto DNS paraugu. DNS nešķīst spirtā un tādējādi veido granulas DNS molekulu agregācijas dēļ. Šajā procesā pievieno nātrija acetātu, lai palielinātu nokrišņu pakāpi, palielinot jonu stiprumu. Papildus etanola izgulsnēšanas procesam var izraisīt arī fenola-hloroforma ekstrakcijas procesu. Izmantojot šo metodi, fenols denaturē paraugā esošās olb altumvielas. Pēc centrifugēšanas denaturētie proteīni paliks organiskajā fāzē, savukārt DNS molekulas, kas sajauktas ar hloroformu, atradīsies ūdens fāzē. Hloroforms noņems fenola atlikumus. Kad ekstrakcija ir pabeigta, DNS tiek turēta izšķīdinātu TE buferšķīdumā vai īpaši tīrā ūdenī.
Kas ir RNS ekstrakcija?
RNS attīrīšana ir process, kurā RNS tiek attīrīta no bioloģiskā parauga. Sakarā ar ribonukleāzes klātbūtni šūnās un audos šis process ir sarežģīts. Ribonukleāzes enzīmam ir spēja ātri noārdīt RNS. Ribonukleāžu ķīmiskā būtība ir ārkārtīgi stabila, un tās ir grūti inaktivēt. Ribonukleāžu neitralizācija ir iespēja. Tā kā šis enzīms ir visuresošs šūnās un audos, tiek izstrādātas īpašas metodes RNS ekstrakcijai. No daudzajām metodēm izplatītā metode ir guanidīnija tiocināta-fenola-hloroforma ekstrakcija.
Attēls 02: RNS ekstrakcija
Gvanidīnija tiocināta-fenola-hloroforma ekstrakcijas metode ir atkarīga no centrifugēšanas un fāzu atdalīšanas. Centrifugējamais maisījums sastāv no ūdens parauga un ar ūdeni piesātināta šķīduma, kas sastāv no fenola un hloroforma. Pēc centrifugēšanas šķīdums sastāv no augšējās ūdens fāzes un apakšējās organiskās fāzes neitrālos pH apstākļos (pH 7-8). RNS atrodas ūdens fāzē. Organiskā fāze parasti sastāv no olb altumvielām, kas izšķīdinātas fenolā, un lipīdiem, kas izšķīdināti hloroformā. Pievieno haotropisku līdzekli (molekulu, kurai ir spēja saraut ūdeņraža saites starp ūdens molekulām); to sauc par guanidīnija tiocianātu. Šim aģentam ir spēja denaturēt proteīnus, kas ietver ribonukleāzes, kas var noārdīt RNS un ir iesaistītas šūnu lizē. Tas arī atdala rRNS no ribosomu proteīniem. Pēdējais RNS attīrīšanas posms ir ūdens fāzes nogulsnes mazgāšana ar etanolu. RNS var arī attīrīt, izmantojot šķidro slāpekli.
Kādas ir līdzības starp DNS un RNS ekstrakciju?
- Abos ekstrakcijas procesos tiek izmantotas kaitīgas ķīmiskas vielas, piemēram, fenols un hloroforms.
- Centrifugēšana ir būtisks paņēmiens abiem procesiem.
- Etanolu izmanto, lai nomazgātu nogulsnes un iegūtu attīrītu DNS vai RNS.
Kāda ir atšķirība starp DNS un RNS ekstrakciju?
DNS pret RNS ekstrakciju |
|
| DNS ekstrakcija ir process, kurā no organisma vai parauga tiek iegūta DNS. | RNS ekstrakcija ir process, kurā no parauga ekstrahē RNS. |
| Soļi | |
| DNS ekstrakcijas process sastāv no trīs dažādiem posmiem ar diviem izvēles posmiem. | RNS ekstrakcijas process sastāv no četriem dažādiem posmiem. |
| Reaģenti | |
| DNS ekstrakcijai tiek izmantotas virsmaktīvās vielas, proteāzes (pēc izvēles), spirts, hloroforms, fenols, nātrija acetāts. | RNS ekstrakcijai izmanto guanidija tiocianātu, hloroformu, fenolu, etanolu. |
Kopsavilkums - DNS pret RNS ekstrakciju
DNS un RNS ekstrakcija ir būtiski aspekti eksperimentālajās procedūrās, lai pētītu molekulāro bioloģiju, ģenētiku un biotehnoloģiju. Abos procesos tiek izmantoti līdzīgi reaģenti, bet RNS ekstrakcijā tiek izmantots īpašs reaģents, kas pazīstams kā guanidija tiocianāts, kas samazina ribonukleāžu aktivitāti. Šī ir galvenā atšķirība starp DNS un RNS ekstrakciju.
Lejupielādēt PDF versiju DNS vs RNS ekstrakcija
Varat lejupielādēt šī raksta PDF versiju un izmantot to bezsaistē saskaņā ar atsauces piezīmi. Lūdzu, lejupielādējiet PDF versiju šeit Atšķirība starp DNS un RNS ekstrakciju
