Galvenā atšķirība starp BL21 un DH5 Alpha ir tāda, ka BL21 ir proteāzes deficīta ģenētiski modificēta kompetenta E. coli šūna, ko galvenokārt izmanto proteīnu ekspresijai, savukārt DH5 Alpha ir ģenētiski pārveidota kompetenta E. coli šūna ar recA1 mutāciju, ko galvenokārt izmanto. plazmīdas transformācijai.
E. coli ir viens no slavenajiem organismiem, ko izvēlas rekombinanto proteīnu ražošanā. Gadu gaitā tā ir kļuvusi par populārāko izteiksmes platformu. To izmanto arī kā šūnu rūpnīcu. BL21 un DH5 Alpha ir divas ģenētiski modificētas E. coli šūnas, kuras pašlaik izmanto attiecīgi proteīnu ekspresijai un plazmīdu transformācijai.
Kas ir BL21?
BL21 ir proteāzes deficīta ģenētiski pārveidota kompetenta E. coli šūna, ko galvenokārt izmanto proteīnu ekspresijai. E. coli BL21 ir baktēriju šūna, kas iegūta no B celma. Tam ir Lon proteāzes un ompT ārējās membrānas proteāzes defekti. To parasti izmanto rekombinanto proteīnu ekspresijai, jo tas parasti nodrošina ekspresēto proteīnu stabilitāti. BL21 ir noderīgs proteīnu ekspresijai ar pCold I-IV DNS un pCold TF DNS. Taču šī kompetentā E. coli šūna nav paredzēta proteīnu ekspresijas sistēmai, izmantojot T7 promotoru, piemēram, pET sistēmu. Iemesls tam ir tas, ka BL21 neizpauž T7 RNS polimerāzi. Turklāt to nav ieteicams izmantot plazmīdas konstruēšanai vai sagatavošanai, jo tai nav recA mutācijas.
Attēls 01: BL21
BL21 pirmo reizi aprakstīja Studier 1986. gadā pēc dažādām B līnijas modifikācijām. BL21 šūnām trūkst LON proteāzes, kas noārda daudzas svešas olb altumvielas. Turklāt trūkst cita gēna, kas kodē ārējās membrānas proteāzi (OmpT), kuras funkcija ir noārdīt ekstracelulāros proteīnus. Šo proteīnu trūkums izraisa veiksmīgu svešu proteīnu ražošanu E. coli BL21 šūnās. Turklāt hsdSB mutācija šajās šūnās novērš svešas DNS metilēšanu un traucējumus BL21 šūnās.
Kas ir DH5 Alpha?
DH5 Alpha ir ģenētiski izstrādāta kompetenta E. coli šūna ar recA1 mutāciju, ko galvenokārt izmanto plazmīdu transformācijai. DH5 Alpha E. coli šūnas ir ģenētiski konstruējis amerikāņu biologs Duglass Hanahans, lai palielinātu transformācijas efektivitāti. DH5 alfa šūnai ir trīs atšķirīgas mutācijas: recA1, endA1 un lacZΔM15. recA1 ir viena punkta mutācija, kas aizvieto glicīnu 160 ar asparagīnskābes atlikumu recA polipeptīdā. Šī mutācija atspējo rekombināžu aktivitāti un inaktivē homologo rekombināciju. endA1 mutācija inaktivē intracelulāro endonukleāzi, kas neļauj tai noārdīt ievietoto plazmīdu.
2. attēls: DH5 alfa
Turklāt lacZΔM15 mutācija nodrošina transformēto šūnu zili b alto skrīningu. Šīs šūnas ir kompetentas šūnas. Tos bieži izmanto ar kalcija hlorīda transformāciju, lai ievietotu vēlamo plazmīdu. Jaunākie pētījumi atklāja, ka DH5 alfa šūna ar Hanahan metodi bija visefektīvākā kompetentā šūna plazmīdu transformācijai.
Kādas ir līdzības starp BL21 un DH5 Alpha?
- BL21 un DH5 Alpha ir divi ģenētiski modificēti E.coli
- Abas ir kompetentas šūnas.
- Tās sastāv no atšķirīgām mutācijām.
- Abām nav dabiskas dzīvotnes.
- Tos izmanto laboratorijas nolūkos, piemēram, ekspresijas pētījumos un klonēšanas procedūrās.
Kāda ir atšķirība starp BL21 un DH5 Alpha?
BL21 ir proteāzes deficīta ģenētiski pārveidota kompetenta E. coli šūna, ko galvenokārt izmanto proteīnu ekspresijai. No otras puses, DH5 Alpha ir ģenētiski pārveidota kompetenta E. coli šūna ar recA1 mutāciju, ko galvenokārt izmanto plazmīdu transformācijai. Tātad, šī ir galvenā atšķirība starp BL21 un DH5 Alpha. Turklāt BL21 E. coli šūnā nav recA1 mutācijas, savukārt DH5 Alpha E. coli šūnā ir recA1 mutācija.
Šajā infografikā tabulas veidā ir norādītas atšķirības starp BL21 un DH5 Alpha.
Kopsavilkums - BL21 pret DH5 Alpha
Nepatogēnos E. coli celmus ģenētiski izstrādājuši zinātnieki laboratorijas ekspresijas pētījumiem un klonēšanas nolūkiem. BL21 un DH5 Alpha ir divas ģenētiski modificētas E. coli šūnas. BL21 galvenokārt izmanto proteīnu ekspresijas pētījumiem. No otras puses, DH5 Alpha galvenokārt tiek izmantots plazmīdu transformācijas nolūkos. Tādējādi šis ir kopsavilkums par atšķirību starp BL21 un DH5 Alpha.
