Galvenā atšķirība starp konkurējošo un nekonkurējošo ELISA ir tāda, ka konkurētspējīgā ELISA testā izmanto inhibējošu antigēnu, savukārt nekonkurējošā ELISA testā neizmanto inhibējošu antigēnu.
Ar enzīmiem saistītais imūnsorbcijas tests (ELISA) ir imunoloģisks tests, kas nosaka dažādus mērķus, piemēram, antivielas, antigēnus, proteīnus un glikoproteīnus. Tā ir ātra un vienkārša izpildes metode. Tāpēc to biežāk izmanto pētniecības un diagnostikas nolūkos. ELISA ietver fermentu izmantošanu un specifisku antivielu un antigēnu saistīšanu. Pamatojoties uz to, kā notiek reakcijas, ir četri ELISA veidi: tiešā ELISA, netiešā ELISA, sendviča ELISA un inhibīcijas ELISA. Tiešā, netiešā un sviestmaižu ELISA ir nekonkurējošā ELISA veidi, savukārt inhibējošā ELISA ir pilnīgas ELISA veids. Šī raksta galvenais mērķis ir apspriest atšķirību starp konkurētspējīgu un nekonkurējošu ELISA.
Kas ir konkurējošā ELISA?
Konkurējošā ELISA mēra antigēna koncentrāciju paraugā, nosakot signāla traucējumus. Šeit testā tiek izmantots inhibitora antigēns. Tādējādi tas ir inhibīcijas ELISA veids. Šīs procedūras laikā paraugā esošie antigēni sacenšas ar izvēlēto atsauces antigēnu par saistīšanos ar noteiktu iezīmētās antivielas daudzumu. Turklāt šī procedūra sākas ar parauga inkubāciju ar lieko iezīmētās antivielas daudzumu. Atsauces antigēnam jābūt arī iepriekš pārklātam uz vairāku iedobju testa plāksnes. Pēc tam parauga maisījums jāpievieno testa plāksnei, kurā ir atsauces antigēns. Brīvās antivielas saistīsies ar atsauces antigēnu atkarībā no antigēna daudzuma paraugā. Tādējādi, ja paraugā ir vairāk antigēna, tiks noteikts mazāk atsauces antigēna. Tādējādi tas rada vājāku signālu.
Attēls 01: ELISA
Turpretim, ja paraugā ir mazāks daudzums antigēna, arvien vairāk atsauces antigēnu aizņems antivielas un dos spēcīgu signālu. Tā kā konkurējošā ELISA dod spēcīgāku signālu, ja paraugs satur mazu antigēnu daudzumu, konkurējošā ELISA ir ļoti jutīgs tests pat paraugiem ar nelielu skaitu antigēnu.
Dažos konkurētspējīgos ELISA komplektos marķētas antivielas vietā tiek izmantots marķēts antigēns. Šeit iezīmētais antigēns un parauga antigēns sacentīsies par saistīšanos ar primāro antivielu. Tāpat, ja antigēna daudzums paraugā ir mazs, iezīmētā antigēna daudzums, kas saistās ar antivielām, būs lielāks un radīs spēcīgāku signālu.
Kas ir nekonkurējošā ELISA?
No četriem ELISA veidiem trīs veidi ir nekonkurējoša ELISA. Tie ir tiešā ELISA, netiešā ELISA un sendviča ELISA. Visi trīs formāti darbojas saskaņā ar kopējo ELISA principu ar nelielām atšķirībām to metodoloģijā.
Tiešā ELISA izmanto ar enzīmu iezīmētu primāro antivielu. Tādējādi tam nav nepieciešama sekundāra antiviela. Tāpēc tiešā ELISA ir ātrāka nekā cita veida ELISA. Primārā antiviela tieši saistās ar imobilizēto mērķa antigēnu, kas atrodas plāksnē. Tādējādi notiks fermenta-substrāta reakcija, radot redzamu signālu.
Attēls 02: Sviestmaizes ELISA
Atšķirībā no tiešās ELISA, netiešajā ELISA izmanto neiezīmētu primāro antivielu un enzīmu iezīmētu sekundāro antivielu. Kad primārā antiviela saistās ar imobilizēto antigēnu, sekundārā antiviela saistās ar primāro antivielu. Sekundārās antivielas enzīms reaģēs ar antigēnu un radīs redzamu signālu. Sandwich ELISA atšķiras gan no tiešās, gan netiešās ELISA. Šeit antiviela tiek imobilizēta pie testa plāksnes sienas.
Kādas ir līdzības starp konkurētspējīgu un nekonkurējošu ELISA?
- Konkurētspējīga un nekonkurējoša ELISA ir divu veidu imūnsorbcijas testu metodes.
- Tās ir ļoti elastīgas un jutīgas metodes.
- Turklāt gan konkurētspējīgs, gan nekonkurējošs ELISA tests ir ar enzīmiem saistīti imūntesti.
- Abas metodes arī ģenerē signālu fermenta-substrāta reakcijas dēļ.
Kāda ir atšķirība starp konkurējošo un nekonkurējošo ELISA?
Konkurētspējīgs ELISA ir ELISA veids, kas balstās uz pabeigšanu starp analizējamo antigēnu un iezīmēto antigēnu ierobežotam specifiskas antivielas daudzumam. No otras puses, šāda konkurence nepastāv starp interesējošo antigēnu un atsauces antigēnu nekonkurējošā ELISA testā. Tādējādi šī ir galvenā atšķirība starp konkurējošo un nekonkurējošo ELISA. Tāpat konkurējošā ELISA ir inhibējoša ELISA, savukārt nekonkurējošā ELISA nav inhibējošā ELISA. Tātad šī ir arī atšķirība starp konkurētspējīgu un nekonkurējošu ELISA.
Turklāt konkurētspējīga ELISA metode ir piemērotāka neliela interesējošā antigēna daudzuma mērīšanai. Tā ir jutīga metode. No otras puses, nekonkurētspējīga ELISA nav atkarīga no paraugā esošo antigēnu skaita. Tāpēc šī ir arī atšķirība starp konkurējošo un nekonkurējošo ELISA.
Zemāk infografikā ir salīdzinoši izskaidrota atšķirība starp konkurējošo un nekonkurējošo ELISA.
Kopsavilkums - konkurētspējīga un nekonkurējoša ELISA
Konkurējošā un nekonkurējošā ELISA ir divi galvenie ELISA jeb ar enzīmu saistīto imūnsorbcijas testu veidi. Apkopojot atšķirību starp konkurējošo un nekonkurējošo ELISA, konkurējošā ELISA balstās uz konkurenci starp interesējošo antigēnu un atsauces antigēnu pret ierobežotu antivielu daudzumu. Tāpēc konkurējošā ELISA tiek nosaukta arī par inhibīcijas ELISA. No otras puses, nekonkurējošā ELISA nepaļaujas uz konkurenci starp mērķa antigēniem un atsauces antigēniem. Tas izmanto marķēto specifisko antivielu pārpalikumu pret interesējošo analītu. Tādējādi šī ir galvenā atšķirība starp konkurējošo un nekonkurējošo ELISA. Tiešā ELISA, netiešā ELISA un sendviča ELISA ir trīs galvenie nekonkurējošās ELISA veidi.
