Galvenā atšķirība starp Elisa un Elispot ir tā, ka Elisa ir ar enzīmu saistīts imūnsorbcijas tests, kas nosaka izdalīto signalizācijas proteīnu kopējo koncentrāciju, savukārt Elispot ir ar enzīmu saistīts imūnsorbcijas tests, kas nosaka atsevišķas citokīnus izdalošās šūnas.
Elisa un Elispot ir divi ar enzīmiem saistīti imūnsorbcijas testi, ko plaši izmanto medicīnā, augu patoloģijā, biotehnoloģijā un dažādās farmācijas nozarēs. Izmantojot šīs metodes, proteīna analītu nosaka pret to vērsta antiviela. Elisa ir vispopulārākais ar enzīmu saistīts imūnsorbcijas tests, ko izmanto laboratorijās. No otras puses, Elispot ir ar enzīmu saistīts imūnsorbcijas tests, ko neizmanto Elisa vietā, bet gan papildus Elisa laboratorijās.
Kas ir Elisa Assay?
Elisa ir ar enzīmu saistīts imūnsorbcijas tests, kas nosaka kopējo izdalīto signalizācijas proteīnu koncentrāciju. Tas ir plaši izmantots analītiskā bioķīmijas tests, ko pirmo reizi aprakstīja Engvall un Perlmann 1971. gadā. Šajā metodē tiek izmantots cietās fāzes tipa enzīmu imūntests, lai noteiktu konkrēta proteīna klātbūtni šķidrā paraugā, izmantojot antivielas, kas vērstas pret šo konkrēto proteīnu. Šis tests ir plaši izmantots diagnostikas rīks medicīnā, augu patoloģijā un biotehnoloģijā.
ELISA testa mehānisms
Lielākajā daļā ELISA testa sākumā nezināms daudzums antigēna tiek imobilizēts uz cieta balsta (mikrolitra plāksnes). Pēc tam atbilstošā primārā antiviela tiek uzklāta uz cietās atbalsta virsmas. Šī antiviela veido kompleksu ar antigēnu (antigēna-antivielu komplekss). Ar antigēnu saistīto primāro antivielu var noteikt ar sekundāru antivielu, kas ir saistīta ar fermentu, izmantojot biokonjugāciju. Elisa testa pēdējā posmā pievieno vielu, kas satur fermenta substrātu. Ja primārā antiviela pareizi saistās ar antigēnu, substrāts rada nosakāmas krāsas izmaiņas. Galu galā tas nosaka antigēna daudzumu paraugā.
Attēls 01: dažādi Elisa veidi
Turklāt Elisai ir dažādas pieejas, piemēram, tiešā Elisa un netiešā Elisa. Pašlaik tiek izmantoti dažādi Elisa testi, lai noteiktu cilvēku patogēnus, piemēram, Mycobacterium tuberculosis, rotavīrusu, B hepatīta vīrusu, C hepatīta vīrusu, enterotoksīnu producējošus E.coli, HIV un SARS-CoV-2.
Kas ir Elispot Assay?
Elispot ir ar enzīmu saistīts imūnsorbcijas tests, kas nosaka atsevišķas citokīnus izdalošās šūnas. Cecil Czerkinsky pirmo reizi aprakstīja ELISpot 1983. gadā. Tas ir testa veids, kas koncentrējas uz vienas šūnas citokīnu sekrēcijas biežuma kvantitatīvu mērīšanu. Tas ir arī klasificēts kā paņēmiens, kas izmanto antivielas, lai noteiktu bioloģisko vai ķīmisko olb altumvielu analītu. Fluorospota tests ir Elispot testa variants, kurā tiek izmantota fluorescence, lai analizētu vairākas analītas (vairāk slepenas olb altumvielas).
Elispota testa mehānisms
Šajā mehānismā sākotnēji mikrolitru plākšņu iedobēm pievieno citokīniem specifiskas monoklonālās antivielas. Pēc tam iedobēm pievieno vēlamās novērojamās šūnas. Vēlāk šūnas tiek inkubētas. Šūnu inkubācijas laikā šūnām ir atļauts reaģēt uz jebkādiem stimuliem un izdalīt citokīnu. Citokīni, ko izdala inkubētās šūnas, pievienosies antivielām, jo šūnas ieskauj citokīniem specifiskas monoklonālās antivielas.
2. attēls: Elispot tests
Lai noteiktu šīs citokīniem specifiskās monoklonālās antivielas, iedobei pievieno biotinilētas specifiskās noteikšanas antivielas. Biotinilētas specifiskās noteikšanas antivielas iedobēs uztver citokīniem specifiskās monoklonālās antivielas. Turklāt iedobēm pievieno streptavidīna-enzīma konjugātus, lai tie saistīties ar noteikšanas antivielām. Pēdējā posmā iedobēm pievieno īpašus substrātus. Enzīmu konjugātu un substrātu reakcijas iedobēs rada atšķirīgus plankumus. Šīs atšķirīgās vietas tiek nolasītas automatizētā ELISpot lasītājā. Galu galā tas turpmāk aprēķinās citokīnu sekrēcijas biežumu.
Kādas ir Elisa un Elispot līdzības?
- Tie abi ir ar enzīmiem saistīti imūnsorbcijas testi.
- Abos testos tiek atklāti specifiski proteīnu analīti.
- Šajos testos tiek izmantotas specifiskas antivielas, lai identificētu olb altumvielu analītus.
- Abos testos tiek izmantoti fermenti un substrāti.
- Tās tiek izmantotas kā diagnostikas instruments medicīnas laboratorijās.
Kāda ir atšķirība starp Elisa un Elispot?
Elisa ir ar enzīmu saistīts imūnsorbcijas tests, kas nosaka kopējo izdalīto signalizācijas proteīnu koncentrāciju. No otras puses, Elispot ir ar enzīmu saistīts imūnsorbcijas tests, kas mēra atsevišķas citokīnus izdalošās šūnas. Tātad, šī ir galvenā atšķirība starp Elisa un Elispot. Turklāt Elisa testā antigēns vispirms tiek imobilizēts mikrolitru iedobēs. Turpretim Elispot testā antiviela vispirms tiek imobilizēta mikrolitru iedobēs. Tādējādi šī ir vēl viena atšķirība starp Elisa un Elispot.
Tālāk esošajā infografikā tabulas veidā ir sniegta detalizēta Elisa un Elispot atšķirības analīze.
Kopsavilkums – Elisa vs Elispot
Elisa un Elispot ir divi ar enzīmiem saistīti imūnsorbcijas testi, ko plaši izmanto medicīnā, augu patoloģijā, biotehnoloģijā un dažādās farmācijas nozarēs. Elisa nosaka ligandu (olb altumvielu) klātbūtni šķidrā paraugā, izmantojot antivielas, kas vērstas pret mērāmo ligandu. Elispot tests ir plaši izmantota imūnās atbildes kontroles metode. Tas nosaka atsevišķas citokīnus izdalošās šūnas, izmantojot antivielas. Tā ir gan imūntesta, gan biotesta metode. Tādējādi šis ir Elisa un Elispot atšķirības kopsavilkums.
