Galvenā atšķirība - YAC vs M13 Phage Vector
DNS klonēšana ir svarīgs process, kas nodrošina svarīgu organismu DNS fragmentu pavairošanu. Tas prasa specifiskas DNS savienošanu ar vektora DNS, lai izveidotu rekombinanto DNS, kas transformējas saimniekorganismā. Vektors ir DNS molekula, kas darbojas kā nesējs sveša ģenētiskā materiāla pārnešanai citā šūnā vai organismā. Tam vajadzētu būt spējīgam vairoties saimniekorganismā un radīt vairākas rekombinantās DNS kopijas. DNS klonēšanai tiek izmantoti dažāda veida vektori. Starp tiem ir divu veidu rauga mākslīgā hromosoma (YAC) un M13 fāga vektors. Galvenā atšķirība starp YAC un M13 fāga vektoru ir tāda, ka YAC ir mākslīga hromosoma, kas replikējas rauga šūnās, savukārt M13 fāga vektors ir vienpavediena cirkulāra bakteriofāga M13 DNS, kas replikējas E Coli šūnās.
Kas ir YAC vektors?
YAC ir mākslīgi izveidota hromosoma, kas spēj pārnēsāt lielu svešas DNS segmentu un vairoties rauga šūnās. Tam ir centromērs, telomērs un autonomi replikējošas sekvences, kas ir būtiskas replikācijai un stabilitātei. YAC jābūt arī selektīvam marķierim vai marķieriem un restrikcijas vietām, lai tas būtu efektīvs klonēšanas vektors. Lielas sekvences, sākot no 1000 līdz 2000 kb, var ievietot YAC un pārnest uz raugu.
Attēls 01: YAC Vector
Kas ir M13 fāga vektors?
Bacteriophage M13 ir vīruss, kas inficē un vairojas ar E Coli. M13 bakteriofāga genoms ir mazs, apmēram 6,7 kb. Tā ir vienpavediena, apļveida un pozitīvu sajūtu DNS. Šis vīruss īpaši inficē E Coli baktērijas caur F pilus. Kad tas baktērijā nonāk ssDNS, tas sintezē savu komplementāro virkni un kļūst par dsDNS vai M13 replikatīvo formu (RF). RF var uzvesties kā plazmīda saimniekorganismā. DsDNS replikējas E Coli un ražo ssDNS ar jauniem fāgiem. Šie jaunie fāgi tiek nepārtraukti atbrīvoti no E Coli, nenogalinot saimniekšūnu. Tomēr infekcija palēnina E Coli augšanu. dsDNS var iegūt no baktēriju šūnām un izmantot kā vektorus DNS klonēšanai. Tie ir pazīstami kā M13 fāgu vektori. Tos var viegli manipulēt un izmantot līdzīgi kā plazmīdu vektorus.
Šo M13 fāgu raksturīgā inficēšanās spēja kalpo kā laba kvalifikācija, ko izmantot kā vektoru gēnu klonēšanai. Izstrādājot M13 vektorā, tā genomā jāiekļauj vairāki elementi. Tie ir lac repressora (lac I) proteīna gēns, lac Z gēna operatora proksimālais reģions, lac promotors un daudzkārtēja klonēšanas vieta (polilinkers). Ja M13 dsDNS izmanto kā vektorus, to var uzskatīt par plazmīdas vektoru. Tomēr ssDNS M13 izmantošanai ir priekšrocības DNS sekvencēšanā un uz vietu vērstā mutaģenēzē.
Tā kā M13 fāga vektoram ir vairākas klonēšanas vietas lacZ reģionā, rekombinētos vektorus var viegli identificēt, veicot zilo/b alto koloniju skrīningu agara plāksnēs, kas satur IPTG un X-Gal. Zilās plāksnes, kas veidojas uz plāksnēm, nesatur rekombinētos fāgus. Tāpēc klonēšanas nolūkā var atlasīt fāgus ar ieliktņiem.
2. attēls: bakteriofāgs M13
Kāda ir atšķirība starp YAC un M13 Phage Vector?
YAC vs M13 Phage Vector |
|
| YAC ir ģenētiski pārveidota hromosoma, kas spēj pārnēsāt lielu svešas DNS segmentu un vairoties rauga šūnās. | M13 fāga vektors ir vīrusu vektors, ko izstrādājis bakteriofāgs M13 un ko izmanto svešas DNS ievietošanai E Coli. |
| Mērķis | |
| YAC tika izstrādāti, lai klonētu lielus genoma DNS fragmentus raugā. | M13 fāgu vektori tiek izmantoti svešas DNS ievietošanai E Coli. |
| Ievietot garumu | |
| YAC var saturēt megabāzes izmēra genoma ieliktņus (1000–2000 kb). | Iesliktņu izmērs ir aptuveni 1500 bps. |
| Būvniecība | |
| YAC DNS ir grūti attīrīt neskartu, un YAC vektoru sistēmas ģenerēšanai nepieciešama augsta koncentrācija. | Tas notiek, izmantojot ciklisku fotosintētisko elektronu ķēdi. |
| Stabilitāte | |
| YAC ir nestabila. | M13 fāgus var viegli iegūt. |
| Izmērs | |
| Enzīmi ir lielākas molekulas. | M13 fāgi ir stabili nekā YAC. |
Kopsavilkums - YAC vs M13 Phage Vector
YAC ir mākslīgi konstruēta vektoru sistēma, kas izmanto noteiktu rauga hromosomas reģionu, lai rauga šūnās ievietotu lielus ģenētiskā materiāla segmentus. M13 fāga vektors ir vektoru sistēma, kas iegūta no bakteriofāga M 13 un kas izmanto E coli kā saimniekorganismu. Šī ir galvenā atšķirība starp YAC un M13 Phage Vector. Abi ir vienlīdz noderīgi rekombinantās DNS tehnoloģijā un gēnu klonēšanā.
