Galvenā atšķirība - transformanti pret rekombinantiem
Rekombinācija un transformācija ir divi būtiski gēnu inženierijas soļi, kur organisma īpašības tiek apzināti modificētas, manipulējot ar tā ģenētisko materiālu. Rekombinācija ir process, kurā svešā DNS tiek iekļauta vektora genomā un veidojas rekombinantās DNS molekula. Transformācija ir nākamais solis, kurā rekombinantā molekula tiek ievadīta saimniekorganismā. Saimnieka šūna vai organisms atvieglo rekombinantās molekulas ekspresiju. Galvenā atšķirība starp transformantiem un rekombinantiem ir tā, ka transformanti ir šūnas vai organismi, kas ņem iekšā rekombinanto molekulu un atvieglo ekspresiju, savukārt rekombinanti ir vektori, kas ļauj ievietot svešu DNS savā genomā un transportēt saimnieka transformantos ekspresijai.
Kas ir transformanti?
Transformanti ir šūnas vai organismi, kuros ekspresijai tiek uzņemta rekombinantā DNS. Baktērijas parasti izmanto kā saimniekorganismus gēnu inženierijā, jo tās ir viegli audzēt, vairoties un apstrādāt laboratorijas apstākļos, un transformācijas process ir vienkāršs salīdzinājumā ar citiem organismiem. Populārākā gēnu inženierijā izmantotā saimniekbaktērija ir baktērija E coli.
Transformācijas procesa laikā saimniekšūnas tiek stimulētas uzņemt rekombinantos. Tomēr dažas saimniekšūnas neuzņem rekombinantās molekulas. Tos sauc par netransformantiem, un šūnas, kurās ir rekombinantās DNS molekulas, sauc par transformantiem. Transformantu atlase no netransformantiem tiek veikta, izmantojot molekulārajā bioloģijā atlasāmos marķierus. Atlasāmi marķieri tiek ievietoti vektora genomā kopā ar DNS ieliktni. Parasti izmantotie selektīvie marķieri ir pret antibiotikām rezistenti gēni. Marķieru gēni atvieglo transformantu diferenciāciju un turpina procesu. Pēc transformācijas procesa baktēriju audzē antibiotikas saturošā vidē. Tikai transformanti spēj augt šajā barotnē, jo tiem ir iekšā esošie rekombinanti.
Kad rekombinantā DNS molekula ir transformēta saimniekorganisma iekšienē, svešā DNS var tikt integrēta saimniekšūnas genomā vai palikt neintegrēta citoplazmā. Tomēr svešās DNS ekspresija un replikācija notiek saimniekorganismā un rada vēlamo procesa rezultātu.
Kas ir rekombinanti?
Rekombinants ir organisms vai šūna, kurai ir rekombinēts genoms, kas satur svešu DNS. Rekombinanti ir gēnu inženierijas procesa rezultāts. Tie ir mākslīgi konstruēti in vitro, ievietojot interesējošos gēnus un modificējot genomu. Bieži baktēriju plazmīdas un bakteriofāgi darbojas kā rekombinanti gēnu inženierijā. Tam ir dažādu DNS himēras. Rekombinantās DNS molekula pārnēsā svešu DNS uz saimniekorganismu un liek tai izteikties un veidot vēlamo produktu.
Rekombinantās molekulas tiek konstruētas, izmantojot restrikcijas endonukleāzes un DNS ligāzes. Vēlamais DNS fragments tiek atdalīts no sākotnējā organisma un ievietots vektorā, lai izveidotu rekombinantu transformācijai. Interesējošā gēna griešana un vektora organisma atvēršana jāveic, izmantojot to pašu restrikcijas enzīmu, lai izveidotu saderīgus lipīgos galus, kas tos savieno. Kad svešā DNS ir iekļauta vektora genomā, to sauc par rekombinanto vai rekombinanto DNS molekulu.
Attēls 02: Rekombinantā DNS
Kāda ir atšķirība starp transformantiem un rekombinantiem?
Transformanti pret rekombinantiem |
|
| Transformanti ir šūnas, kuru iekšpusē ir rekombinantās DNS molekula. | Rekombinanti ir nesējmolekulas, kuru genomā ir ievietota sveša DNS. |
| Svešas DNS izpausme | |
| Tās ir saimniekšūnas, kas spēj ekspresēt rekombinanto DNS. | Tiem jāspēj pašam vairoties saimniekorganismā. |
| Atlase | |
| Šūnas, kuras var viegli audzēt un vairoties, tiek atlasītas kā saimniekšūnas. | Tām jābūt viegli izņemamām, un tajos jāiekļauj atlasāmi marķieri. |
Kopsavilkums - Transformanti pret rekombinantiem
Transformanti ir šūnas vai organismi, kuru iekšpusē ir rekombinantās DNS molekulas. Rekombinanti ir organismi vai šūnas, kurām ir veikta ģenētiska rekombinācija un kuru genomos ir sveša DNS. Baktēriju šūnas bieži izmanto kā saimniekšūnas transformācijai, un plazmīdas un bakteriofāgus bieži izmanto kā vektorus rekombinantās DNS tehnoloģijā. Šī ir atšķirība starp transformantiem un rekombinantiem.
