Galvenā atšķirība - gēla elektroforēze un SDS lapa
Gēla elektroforēze ir metode, kas atdala makromolekulas elektriskajā laukā. Molekulārajā bioloģijā tā ir izplatīta metode DNS, RNS un proteīnu atdalīšanai no maisījumiem atbilstoši to molekulārajiem izmēriem. SDS lapa ir gēla elektroforēzes veids, ko izmanto proteīnu atdalīšanai no olb altumvielu maisījuma, pamatojoties uz to izmēriem. Gēla elektroforēze ir termins, ko lieto, lai apzīmētu parasto paņēmienu, ko izmanto DNS, RNS un olb altumvielu atdalīšanai, savukārt SDS Page ir viena veida gēla elektroforēze. Šī ir galvenā atšķirība starp gēla elektroforēzi un SDS lapu.
Kas ir gēla elektroforēze?
Gēla elektroforēze ir plaši izplatīta metode, ko izmanto laboratorijās, lai no to maisījumiem atdalītu uzlādētas molekulas, piemēram, DNS, RNS, proteīnus utt. Gēla elektroforēzē izmanto želeju. Tas darbojas kā molekulārais siets. Gēla elektroforēzē tiek izmantoti divu veidu gēli, proti, agaroze un poliakrilamīds. Gēla un gēla preparāta izvēle ir svarīgi faktori, kas jāņem vērā gēla elektroforēzē, jo gēla poru izmērs ir rūpīgi jāmaina, lai molekulas labi atdalītos ar gēla elektroforēzes palīdzību. Gēla elektroforēzei ir elektriskais lauks, kas savienots ar diviem gēla galiem. Gēla vienā galā ir pozitīvs lādiņš, bet otrs gals ir negatīvi.
DNS un RNS ir negatīvi lādētas molekulas. Kad tie ir ievietoti gēlā no gēla negatīvā gala un uzklāti uz elektrisko lauku, tie migrē cauri gēla porām uz pozitīvi lādēto gēla galu. Migrācijas ātrums ir atkarīgs no lādiņa un molekulas lieluma. Mazākas molekulas viegli migrē caur gēla porām nekā lielākas molekulas. Tādējādi mazākas molekulas pārvietojas lielu attālumu cauri želejai, un lielākās molekulas pārvietojas nelielā attālumā. Lai novērotu molekulu pārvietošanos pa gēlu, tiek izmantotas īpašas krāsvielas. Elektriskais lauks tiek iedarbināts uz noteiktu laika periodu un tiek apturēts, lai novērstu molekulu zudumu un saglabātu molekulas to pārvietotajās pozīcijās. Želejā var novērot dažādas joslas. Šīs joslas attēlo dažāda izmēra molekulas. Tādējādi gēla elektroforēze ir noderīga, lai diferencētu molekulas pēc to izmēra.
Gēla elektroforēze ir iekļauta dažādās metodēs kā sagatavošanas paņēmiens molekulārajā bioloģijā, piemēram, PCR, RFLP, klonēšana, DNS sekvencēšana, Southern blotēšana, genoma kartēšana utt.
Attēls 01: Agarozes gēla elektroforēze
Kas ir SDS lapa?
Nātrija dodecilsulfāta poliakrilamīda gēla elektroforēze (SDS lapa) ir gēla elektroforēzes veids, ko izmanto proteīnu atdalīšanai. Ja proteīnu atdalīšanai izmanto gēla elektroforēzi, ir nepieciešama īpaša apstrāde, jo proteīni nav negatīvi lādēti, piemēram, DNS un RNS, un nemigrē uz pozitīvo vai negatīvo galu. Tādējādi proteīni tiek denaturēti un pārklāti ar negatīvu lādiņu pirms gēla elektroforēzes. To veic, izmantojot mazgāšanas līdzekli, ko sauc par nātrija dodecilsulfātu (SDS). Gēla elektroforēze, kurā atbalsta barotnei izmanto SDS un poliakrilamīda gēlu, ir pazīstama kā SDS lapa. Šo paņēmienu parasti izmanto bioķīmijā, ģenētikā, kriminālistikā un molekulārajā bioloģijā.
SDS lapas laikā olb altumvielas tiek sajauktas ar SDS. SDS izvērš proteīnus lineārā formā un pārklāj tos ar negatīvu lādiņu, kas ir proporcionāls to molekulmasai. Negatīvā lādiņa dēļ proteīna molekulas migrē uz gēla pozitīvā lādiņa galu un atdalās atbilstoši to molekulmasai. SDS lapā poliakrilamīds tiek izmantots kā cietais gēla balsts. Faktiskā proteīnu atdalīšana galvenokārt ir atkarīga no gēla īpašībām. Tāpēc poliakrilamīda gēla sagatavošana jāveic rūpīgi un jāizmanto pareizas poliakrilamīda koncentrācijas. Poliakrilamīda gēliem ir augsta izšķirtspēja nekā agarozes gēliem. Tādējādi SDS lapa tiek uzskatīta par augstas izšķirtspējas paņēmienu proteīnu atdalīšanai.
SDS lapa ir denaturējošas gēla elektroforēzes veids. Tam ir liels olb altumvielu analīzes ierobežojums. Tā kā SDS denaturē proteīnus pirms atdalīšanas, tas neļauj noteikt enzīmu aktivitāti, proteīnu saistīšanās mijiedarbību, proteīnu kofaktorus utt.
2. attēls: SDS lapa
Kāda ir atšķirība starp gēla elektroforēzi un SDS lapu?
Gēla elektroforēze pret SDS Lapa |
|
| Gēla elektroforēze ir metode, ko veic makromolekulu atdalīšanai, izmantojot elektrisko lauku. | SDS lapa ir augstas izšķirtspējas gēla elektroforēzes metode, ko izmanto proteīnu atdalīšanai, pamatojoties uz to masu. |
| Gel Run | |
| To var veikt horizontāli vai vertikāli. | SDS lapa vienmēr darbojas vertikāli. |
| Pamatojums atdalīšanai | |
| Atdalīšana notiek atkarībā no uzlādes un izmēra. | Olb altumvielu atdalīšanās notiek atkarībā no masas un lādiņa. |
| Izšķirtspēja | |
| Agarozes gēla elektroforēzei ir zema izšķirtspēja, un poliakrilamīda gēla elektroforēzei ir augstāka izšķirtspēja | SDS lapai ir labāka izšķirtspēja. |
| Denaturācija | |
| Gēla elektroforēze ietver gan denaturēšanas, gan nedenaturēšanas metodes. | SDS lapa denaturē proteīnus pirms atdalīšanas. |
Kopsavilkums - gēla elektroforēze pret SDS lapa
Gēla elektroforēze ir izplatīta metode, ko izmanto DNS, RNS un proteīnu atdalīšanai un analīzei, pamatojoties uz to izmēru un lādiņu. Ir divi galvenie gēla elektroforēzes veidi, proti, agarozes gēla elektroforēze un poliakrilamīda gēla elektroforēze. Agarozes želejas galvenokārt izmanto nukleīnskābju atdalīšanai; ja nepieciešama lielāka izšķirtspēja, tiek izmantoti poliakrilamīda gēli. SDS lapa ir gēla elektroforēzes veids, ko parasti izmanto, lai atdalītu sarežģītus proteīnu maisījumus. To uzskata par augstas izšķirtspējas olb altumvielu atdalīšanas paņēmienu. Šī ir atšķirība starp gēla elektroforēzi un SDS lapu.
