Galvenā atšķirība - SDS lapa pret Western Blot
Western blotēšana ir metode, kas nosaka konkrētu proteīnu no proteīna parauga. Šo paņēmienu veic, izmantojot vairākas galvenās darbības: gēla elektroforēzi, blotēšanu un hibridizāciju. Nātrija dodecilsulfāta poliakrilamīda gēla elektroforēze (SDS lapa) ir sava veida gēla elektroforēzes tehnika, ko izmanto, lai atdalītu olb altumvielas pēc to izmēra (molekulāras masas). Western blot ir īpaša blotēšanas membrānas loksne, ko izmanto, lai pārnestu to pašu proteīnu modeli SDS lapā. Galvenā atšķirība starp SDS Page un Western blot ir tā, ka SDS lapa ļauj atdalīt olb altumvielas maisījumā, savukārt Western blot ļauj noteikt un kvantitatīvi noteikt konkrētu proteīnu no maisījuma. Abi ir noderīgi olb altumvielu analīzes pētījumos.
Kas ir SDS lapa?
SDS lapa ir gēla elektroforēzes metode, ko izmanto olb altumvielu atdalīšanai. To parasti izmanto bioķīmijā, ģenētikā, kriminālistikā un molekulārajā bioloģijā. Kad olb altumvielas ir ekstrahētas no parauga, tās laiž uz gēla, kas sastāv no SDS un poliakrilamīda. SDS ir anjonu mazgāšanas līdzeklis, ko izmanto, lai linearizētu olb altumvielas (denaturētu proteīnus) un piešķirtu negatīvu lādiņu linearizētiem proteīniem proporcionāli to molekulmasai. Poliakrilamīds kļūst par cieto gēla balstu. Denaturētie proteīni, kas ir negatīvi lādēti, caur želeju migrē uz aparāta pozitīvo galu. Atbilstoši proteīnu izmēriem migrācijas ātrums starp olb altumvielām atšķiras un notiek atdalīšanās. Tāpēc SDS lapa ir noderīga atsevišķu proteīnu atdalīšanai, pamatojoties uz to izmēriem.
Poliakrilamīda gēla sagatavošana proteīnu frakcionēšanai ir būtisks solis SDS lapā. Pareiza poliakrilamīda koncentrācija un izmantotā šķērssaistītāja veids spēcīgi ietekmē gēla fizikālās īpašības, kas padara dažādu proteīnu faktisku atdalīšanu. Gēla poru izmēri ir pareizi jāpārvalda, lai nodrošinātu efektīvu atdalīšanu. Tomēr SDS lapa tiek uzskatīta par augstas izšķirtspējas proteīnu atdalīšanas paņēmienu.
SDS Page tehnikai ir liels olb altumvielu analīzes ierobežojums. Tā kā SDS denaturē proteīnus pirms atdalīšanas, tas neļauj noteikt enzīmu aktivitāti, proteīnu saistīšanās mijiedarbību, proteīnu kofaktorus utt.
Attēls 01: SDS lapa
Kas ir Western Blot?
Western blotēšanas tehnika ļauj noteikt konkrētu proteīnu no olb altumvielu maisījuma un izmērīt proteīna daudzumu un molekulmasu. Western blot ir membrāna, ko izmanto blotēšanas procedūrā, lai iegūtu spoguļattēlu proteīnu modeļiem SDS-poliakrilamīda gēlā. Membrāna, ko izmanto Western blotēšanai, galvenokārt sastāv no nitrocelulozes vai polivinilidēndifluorīda (PVDF). Membrānu ar pārnesto proteīnu var izmantot, lai identificētu vēlamo proteīnu. Tam vajadzīgas augstas kvalitātes antivielas, lai hibridizācijas ceļā noteiktu vēlamo proteīnu. Antiviela saistās ar savu specifisko antigēnu un atklāj vēlamā antigēna, kas ir proteīns, klātbūtni.
Proteīnu pārvietošana no SDS poliakrilamīda gēla uz Western blot tiek veikta ar elektroblotēšanu. Tā ir efektīva un ātra metode, kas liek olb altumvielām izdalīties elektroforēzē no gēla un pāriet uz nitrocelulozes membrānu (Western blot).
2. attēls: Western Blot
Kāda ir atšķirība starp SDS Page un Western Blot?
SDS lapa pret Western Blot |
|
| SDS lapa ir gēla elektroforēzes tehnika. | Western blot ir metode, ko veic uz membrānas, lai noteiktu konkrētu proteīnu no maisījuma. |
| Izmantot | |
| SDS lapa ļauj atdalīt olb altumvielas pēc to izmēra. | Western blot ļauj pārnest proteīnus uz SDS lapas gēla, nemainot tā modeli un ļauj hibridizēt ar specifiskām antivielām. |
| Trūkumi | |
| Proteīna denaturācija, augstās izmaksas un neirotoksīnu ķīmisko vielu klātbūtne ir šīs metodes trūkumi. | Šis paņēmiens ir laikietilpīgs, un tam ir nepieciešami labi pieredzējuši personīgi un īpaši kontrolēti apstākļi. |
Kopsavilkums - SDS lapa pret Western Blot
SDS lapa un Western blot ir divas proteīna analīzes metodes. SDS lapa ļauj viegli atdalīt olb altumvielas uz gēla atbilstoši to molekulmasai. Western blot palīdz apstiprināt konkrēta proteīna klātbūtni un daudzumu, veicot hibridizāciju ar specifiskām antivielām. Šī ir atšķirība starp SDS lapu un Western blot.
