Galvenā atšķirība - RPMI vs DMEM
Lielākā daļa pētījumu ir saistīti ar dzīvnieku šūnu kultivēšanu, un tāpēc šajos pētījumos ir nepieciešama dzīvnieku šūnu līniju uzturēšana īpašos augšanas apstākļos. Dzīvnieku šūnu kultivēšana tiek plaši veikta farmakoloģiskajos pētījumos, lai noteiktu zāļu metabolismu, slimību diagnostikā un vēža pētījumos. Šūnu kultūras barotne ir svarīgs dzīvnieku šūnu kultūras aspekts. Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) un Roswell Park Memorial Institute Medium (RPMI) ir divas barotnes, ko izmanto dzīvnieku šūnu kultivēšanai. RPMI ir barotne, ko plaši izmanto zīdītāju šūnu kultivēšanai suspensijas kultūrā. DMEM ir modificēts bāzes barotnes veids ar palielinātu aminoskābju un vitamīnu koncentrāciju līdz četrām reizēm. DMEM izmanto šūnu kultivēšanai adherentās kultūrās. Galvenā atšķirība starp abiem medijiem ir mediju kultūras veids. RPMI izmanto suspensijas kultūrām, savukārt DMEM izmanto pielipušo šūnu kultivēšanai.
Kas ir RPMI?
RPMI jeb Roswell Park Memorial Institute Medium tiek saukts arī par RPMI 1640. Plašsaziņas līdzekļu nosaukumu atvasināja institūts, kurā medijs tika atklāts. Šo barotni parasti izmanto dzīvnieku šūnu kultūrā, īpaši zīdītāju šūnu augšanai. Sākotnēji tie tika izstrādāti cilvēka limfocītu audzēšanai.
RPMI ir iekļautas šādas sastāvdaļas.
- Glikoze
- pH indikators (fenolasarkans)\
- Sāļi (nātrija hlorīds, nātrija bikarbonāts, nātrija fosfāts, kālija hlorīds, magnija sulfāts un kalcija nitrāts)
- Aminoskābes
- Vitamīni (i-inozitols, holīna hlorīds, para-aminobenzoskābe, folijskābe, nikotīnamīds, piridoksīna hidrohlorīds, tiamīna hidrohlorīds, kalcija pantotenāts, biotīns un riboflavīns, cianokobalamīns)
RPMI īpašā iezīme ir paaugstināta fosfātu koncentrācija barotnē. RPMI izmanto 5% oglekļa dioksīda atmosfērā. Tas nodrošinās maksimālos un optimālos apstākļus šūnu augšanai. Barotnes pH tiek uzturēts 8,0 ar bikarbonāta bufersistēmas palīdzību.
Attēls 01: Šūnu kultūra Petri trauciņā
RPMI pielietojumi šūnu kultivācijā
- Cilvēka T un B limfocītu, kaulu smadzeņu šūnu un hibridomas kultivēšana.
- Izmanto, lai pētītu cilvēka neoplastiskās šūnas.
Kas ir DMEM?
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) ir modificēta barotne, kas ir komerciāli sagatavota. Vidēja pulvera sākotnējā tekstūra ir dzeltena. DMEM vitamīnu koncentrācija tiek palielināta līdz četrām reizēm, tādējādi palielinot barības vielu saturu barotnē.
DMEM ir arī modificēts, pievienojot vairāk sāļu, piemēram, dzelzs nitrātu, nātrija piruvātu un dažas neaizvietojamās aminoskābes, piemēram, serīnu un glicīnu. Tiek mainīts arī glikozes sastāvs barotnē. Sākotnējā formula sastāv no 1000 mg/l glikozes, savukārt DMEM koncentrācija tiek palielināta līdz 4500 mg/l. DMEM nepieciešama arī seruma barotnes papildināšana, jo tā nav pilnīga barotne. Visbiežāk DMEM tiek papildināts ar liellopu augļa serumu (FBS). FBS nodrošina kultivēšanas procesam nepieciešamos proteīnus un augšanas faktorus.
Barotnes pH mainās, pievienojot nātrija bikarbonātu. Barotnes pH pirms nātrija bikarbonāta pievienošanas ir aptuveni 6,80 – 7,40, savukārt pH pēc nātrija bikarbonāta pievienošanas ir robežās no 7,60 līdz 8,20. Vides uzglabāšanas temperatūra ir 2–8 0C.
2. attēls: DMEM
DMEM lietojumprogrammas
- Pētīt poliomas vīrusa aplikumu veidošanās spēju peles embriju šūnās.
- Saskares kavēšanas pētījumos.
- Pētīšanā un analīzē vistu šūnu kultūrās.
Kādas ir līdzības starp RPMI un DMEM?
- Dzīvnieku šūnu kultūrā izmanto gan RPMI, gan DMEM.
- Gan RPMI, gan DMEM barotnes ir šķidri preparāti.
- Gan RPMI, gan DMEM barotnes satur augšanai nepieciešamās neaizvietojamās aminoskābes, vitamīnus un neorganiskos sāļus.
- Gan RPMI, gan DMEM datu nesējs ir nepilnīgs. Tāpēc jāpievieno serums.
- Gan RPMI, gan DMEM datu nesēji izmanto glikozi kā oglekļa avotu.
- Gan RPMI, gan DMEM barotnēm ir augstāks pH līmenis.
Kāda ir atšķirība starp RPMI un DMEM?
RPMI pret DMEM |
|
| RPMI ir barotne, ko plaši izmanto zīdītāju šūnu kultivēšanai suspensijas kultūrā. | DMEM ir modificēts bāzes barotnes veids ar paaugstinātu aminoskābju un vitamīnu koncentrāciju. |
| Papildu fosfātu klātbūtne | |
| Parādīt RPMI. | Nav pieejams DMEM. |
| Izmantojiet | |
|
Izmanto šūnu kultivēšanai adherentās kultūrās. Ir pieradis,
|
| Kultūras veidi | |
| RPMI izmanto suspensijas kultūrām. | DMEM izmanto kultūrām ar pielipušām šūnām. |
Kopsavilkums - RPMI pret DMEM
Gan RPMI, gan DMEM tiek plaši izmantoti dzīvnieku šūnu kultivācijā, īpaši dzīvnieku šūnu līniju, tostarp limfocītu, kultivēšanai in vitro. DMEM ir modificēta bāzes barotne, kurā ir paaugstināta barības vielu koncentrācija. RPMI, ko izstrādājis Roswell Park Memorial Institute, un tas ir arī barotne, ko izmanto dzīvnieku šūnu kultivēšanai, īpaši zīdītāju limfocītiem. Abi mediji ir komerciāli pieejami. Šī ir atšķirība starp RPMI un DMEM.
