Galvenā atšķirība starp hromatofokusēšanu un izoelektrisko fokusēšanu ir tāda, ka hromatofokusēšana ir kolonnu hromatogrāfijas metodes veids, kurā tiek izmantoti jonu apmaiņas sveķi, savukārt izoelektriskā fokusēšana ir elektroforēzes tehnikas veids, kurā tiek izmantoti imobilizēti pH gradienta gēli.
Hromatofokusēšana un izoelektriskā fokusēšana ir divas metodes, kas atdala olb altumvielas atbilstoši to izoelektriskajiem punktiem. Gan hromatofokusēšanai, gan izoelektriskajai fokusēšanai ir lieliska izšķirtspēja. Hromatofokusēšana ir augstas izšķirtspējas kolonnu hromatogrāfijas metode, savukārt izoelektriskā fokusēšana ir elektroforētiskā atdalīšanas metode. Turklāt hromatofokusēšanā netiek izmantots elektriskais lauks, savukārt izoelektriskajai fokusēšanai ir nepieciešams elektriskais lauks.
Kas ir hromatofokusēšana?
Hromatofokusēšana ir augstas eluācijas hromatogrāfijas veids, kas atdala olb altumvielas atbilstoši to izoelektriskā punkta atšķirībām. Tas izmanto jonu apmaiņas sveķu kolonnu un iekšēji izstrādātu pH gradientu. Atšķirībā no izoelektriskās fokusēšanas, hromatofokusēšana neietver elektrisko lauku. Hromatofokusēšana ir spēcīgs attīrīšanas paņēmiens, kas var izšķirt ļoti līdzīgas molekulas, pat ja tās atšķiras tikai par 0,02 pH vienībām. Tāpēc hromatofokusēšana ir vislabāk piemērota kā pēdējais pulēšanas posms, kad ļoti līdzīgu komponentu atdalīšanai ir nepieciešama augsta izšķirtspēja.
Hromatofokusēšanā paraugs tiek uzklāts uz kolonnas, sajaucot to ar sākuma buferi. Olb altumvielas, kuru pH ir virs izoelektriskā punkta, ir negatīvi lādētas un paliek kolonnas augšdaļas tuvumā, savukārt citi proteīni, kuru pH ir zem izoelektriskā punkta, migrē lejup pa kolonnu. Proteīns ar augstāko izoelektrisko punktu tiek eluēts vispirms, bet proteīns ar zemāko izoelektrisko punktu tiek eluēts pēdējais no kolonnas. Šo paņēmienu ietekmē vairāki faktori, piemēram, olb altumvielu nogulsnēšanās un pH gradienta linearitāte.
Kas ir izoelektriskā fokusēšana?
Izoelektriskā fokusēšana ir paņēmiens, kas atdala dažādas molekulas, pamatojoties uz to izoelektrisko punktu. To sauc arī par elektrofokusēšanu. Šo metodi bieži izmanto proteīnu atdalīšanai želejā. Izoelektriskajā fokusā paraugu pievieno imobilizētiem pH gradienta (IPG) gēliem. IPG gēls ir akrilamīda gēla matrica, kas kopolimerizēta ar pH gradientu. Olb altumvielas migrē uz katodu, līdz atrod savu izoelektrisko punktu pH reģionu. Kad olb altumviela sasniedz pH līmeni, kuram nav neto lādiņa, migrācija apstājas un veidojas stacionāra josla. Tāpat katrs proteīns rada joslu pH gradienta punktā, kas atbilst tā izoelektriskajam punktam.
Attēls 01: Izoelektriskā fokusēšana
Izoelektriskā fokusēšana ir pirmais divdimensiju gēla elektroforēzes solis. Izmantojot šo paņēmienu, proteīnus vispirms atdala atbilstoši to izoelektriskajiem punktiem ar izoelektrisko fokusēšanu un pēc tam atdala pēc to molekulmasas, izmantojot SDS-PAGE.
Kādas ir līdzības starp hromatofokusēšanu un izoelektrisko fokusēšanu?
- Hromatofokusēšana un izoelektriskā fokusēšana ir divas ļoti izšķirošas metodes.
- Abu pamatā ir olb altumvielu izoelektriskais punkts.
- Šīs metodes izmanto pH gradientu.
- Abas procedūras ir informatīvas cilvēka hemoglobīna variantu raksturošanai.
- Tie var izšķirt molekulas, kurās pI vērtības atšķiras tikai par 0,02 pH vienībām.
Kāda ir atšķirība starp hromatofokusēšanu un izoelektrisko fokusēšanu?
Hromatofokusēšana ir augstas izšķirtspējas kolonnas hromatogrāfijas metode, kas atdala olb altumvielas pēc to izoelektriskā punkta. Turpretim izoelektriskā fokusēšana ir elektroforēzes metode, kas atdala olb altumvielas atbilstoši to izoelektriskajam punktam, izmantojot elektrisko lauku pa pH gradientu, kas veidojas kapilārā. Tātad šī ir galvenā atšķirība starp hromatofokusēšanu un izoelektrisko fokusēšanu.
Vēl viena atšķirība starp hromatofokusēšanu un izoelektrisko fokusēšanu ir tāda, ka hromatofokusēšana neietver elektrisko lauku, savukārt izoelektriskajai fokusēšanai ir nepieciešams elektriskais lauks.
Kopsavilkums - hromatofokusēšana pret izoelektrisko fokusēšanu
Hromatofokusēšana un izoelektriskā fokusēšana ir divas līdzīgas metodes, kurām ir augsta molekulu, īpaši ļoti līdzīgu molekulu, izšķirtspēja. Hromatofokusēšana ir augstas izšķirtspējas kolonnu hromatogrāfijas metode, savukārt izoelektriskā fokusēšana ir elektroforēzes metode. Atšķirībā no izoelektriskās fokusēšanas hromatofokusēšana neietver elektrisko lauku. Tādējādi šeit ir apkopota atšķirība starp hromatofokusēšanu un izoelektrisko fokusēšanu.
